(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210601688.3 (22)申请日 2022.05.30 (71)申请人 厦门大学 地址 361005 福建省厦门市思明区思明南 路422号 (72)发明人 谢静静　周敏　张晓坤　 (74)专利代理 机构 厦门南强之 路专利事务所 (普通合伙) 35200 专利代理师 马应森 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 38/10(2006.01) A61K 38/08(2019.01) A61K 31/56(2006.01) A61K 47/59(2017.01)A61K 47/26(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 共递雷公藤红素和Bcl-2-功能转换肽的树 状大分子自组装体及制备方法与应用 (57)摘要 共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑功能转换肽的树 状大分子自组装体及制备方法与应用。 该自组装 体由聚酰胺 ‑胺型树状大分子 ‑雷公藤红素前药、 聚乙二醇化的靶向适配体和Bcl ‑2‑结构功能转 换肽自组装而成； 雷公藤红素前药由亲水性 PAMAM dendrimers载体表面部分羧基化， 修饰二 硫键， 共价连接雷公藤红素得到； 聚乙二醇化的 靶向适配体由末端基团修饰的核酸适配体与异 功能化的聚乙二 醇共价连接而成； Bcl ‑2‑结构功 能转换肽包含NuBCP ‑9和NuBCP ‑20。 所构建的树 状大分子靶向自组装体可在制备治疗耐药性结 肠癌、 阻断结肠癌转移的防治药物中应用； 也可 在制备靶标EpCAM和Bcl ‑2蛋白丰富的癌症治疗 药物中应用。 权利要求书2页 说明书12页 附图7页 CN 114903872 A 2022.08.16 CN 114903872 A 1.一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向自组装体， 其特征 在于由聚酰胺 ‑胺型树状大分子 ‑雷公藤红素前药、 聚乙二醇化的靶向适配体和Bcl ‑2‑结构 功能转换肽自组装而成。 2.如权利要求1所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体， 其特征在于聚酰胺 ‑胺型树状大分子 ‑雷公藤红素前药 由聚酰胺 ‑胺型树状有机 高分子纳米载体PAMAM  dendrimers与雷公藤红素通过环境响应键连接而制备。 3.如权利要求1所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体， 其特征在于所述聚乙二醇化的靶向适配体由聚乙二醇与 表面靶向适配体之 间通 过共价键连接而制备， 所述表面靶向适配体为末端基团修饰的核酸适配体； 所述聚乙二醇 为异功能化的聚乙二醇。 4.如权利要求1所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体， 其特征在于所述Bcl ‑2‑结构功能转换肽包括抗癌肽NuBCP ‑9和NuBCP ‑20， 其氨基 酸序列分别为FSRSLHSL L、 GDWIDSILAFSRSLHSL LVD。 5.如权利要求2所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体， 其特征在于所述聚酰胺 ‑胺型树状大分子包含第五代和第六代的PAMAM   dendrimers， 末端基团为氨基； 所述雷公藤红素为抗癌天然药用化合物雷公藤红素； 所述聚 酰胺‑胺型树状大分子 ‑雷公藤红素前药的中间连接环境响应键不局限于二硫键， 还包括二 甲基马来 酸酐或顺乌头酸酐。 6.如权利要求3所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体， 其特征在于所述聚乙二醇化的靶向适配体包含但 不限于一种核酸适配体EpCAM； 所述聚乙二醇为异功能化的聚乙二醇， 包含但不限于NH2‑PEG‑COOH， 分子量在3400～10000 之间； 所述聚乙二醇与表面靶向适配 体之间的共价连接 键为酰胺键。 7.如权利要求1所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体的制备 方法， 其特 征在于包括以下步骤： 1)将PAMAM表面的氨基用丁二酸酐进行部分羧基化， 透析冷冻干燥而得到PAMAM ‑COOH 衍生物； 2)将PAMAM ‑COOH衍生物用EDC/NHS活化后， 用胱胺进行二硫键修饰， 透析冷冻干燥而得 到PAMAM‑SS‑NH2衍生物； 3)将雷公藤红素进行EDC/NHS活化后， 共价络合在步骤2)所得到的二硫键修饰的 PAMAM‑SS‑NH2衍生物表面， 透析除去多余的雷公红藤素及溶剂， 冷冻干燥而得到负载雷公 藤红素的树状大分子前 药PAMAM‑SS‑Ce； 4)将末端为羧基的EpCAM靶向核酸适配体用 EDC/NHS活化后， 与异功能化的聚乙二醇 NH2‑PEG‑COOH连接， 透析除去未反应的聚乙二醇， 冷冻干燥而得到聚乙二醇化的靶 向适配 体PEG‑EpCAM； 5)用溶剂溶解步骤3)所得到的PAMAM ‑SS‑Ce、 Bcl‑2‑结构功能转换肽NuBCP9及步骤4) 所得到的PEG ‑EpCAM,并进行混合自由组装， 超滤除去未组装的NuBCP9及PEG ‑EpCAM， 冷冻干 燥得到纳米靶向组装体PAMAM ‑SS‑Ce/NuBCP9/PEG ‑EpCAM。 8.如权利要求7所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体的制备 方法， 其特 征在于：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114903872 A 2在步骤1)中， 所述PAMAM的代数为G6代， 末端基团为氨基； PAMAM︰丁二酸酐的质量比为 2.0～2.3︰ 1， 优选2.27︰ 1； 在步骤2)中， 所述PAMAM ‑COOH︰ 胱胺的质量比为1︰ 0.8～1， 优选1︰ 0.84； 在步骤3)中， 所述雷公藤红素︰ PAMAM ‑SS‑NH2的质量比为231～346︰ 5， 优选231︰ 5； 在步骤4)中， 所述EpCAM︰ NH2‑PEG‑COOH的摩尔比为3︰ 16 0～180； 优选 3︰ 172； 在步骤5)中， 所述PAMAM ‑SS‑Ce︰ NuBCP9︰ PEG ‑EpCAM的最佳组装质量比为1︰ 3︰ 5； 所述溶 剂为pH7.4的PBS溶 液； 组装时间为24h 。 9.如权利要求7所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶向 自组装体的制备方法， 其特征在于在步骤1)、 2)和3)中所用透析袋的截留分子量为3.5KD； 步骤4)中所用透析袋的截留分子量为14KD； 步骤5)中， 所用超滤管的截留分子量为50KD； 所 述树状大分子自组装体PAMAM ‑SS‑Ce/NuBCP9/PEG ‑EpCAM的形貌为近球形， 颗 粒粒径在30～ 40nm， 水合粒径为678.4 ±32.03nm， zeta电势为2.85 ±0.136mV， 呈现电正 性。 10.如权利要求1所述一种共递雷公藤红素和Bcl ‑2‑结构功能转换肽的树状大分子靶 向自组装体在制备治疗耐药性结肠癌和阻断结肠癌转移的防治药物中应用； 还可在制备靶 标EpCAM和Bcl ‑2蛋白丰富的癌症治疗药物及防治癌症转移的药物中应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114903872 A 3