(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210629359.X (22)申请日 2022.05.31 (66)本国优先权数据 202110628817.3 2021.0 6.02 CN (71)申请人 启愈生物技 术 （上海） 有限公司 地址 201203 上海市浦东 新区中国 （上海） 自由贸易试验区张衡路1227号、 哈雷 路1118号孵化楼第二层2 04室、 206室、 207室 (72)发明人 屈向东　潘琴　 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C07K 16/46(2006.01)C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) A61K 38/20(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 抗CD3抗体 变异体、 融合蛋白及应用 (57)摘要 本发明公开了抗CD3抗体变异体、 融合蛋白 及应用。 通过对抗CD3抗体进行突变获得其变异 体。 提供的融合蛋白包括： ( 1)抗肿瘤相关抗原 (TAA)/抗CD3双特异抗体； (2)抗肿瘤相关抗原 (TAA)、 抗CD3及含IL15/IL15Ra的多功能融合蛋 白； (3)抗肿瘤相关抗原(TAA)及含IL15/IL15Ra 的融合蛋白。 还提供了编码抗体分子的核酸分子 及载体， 以及抗体分子的制药用途。 权利要求书9页 说明书29页 序列表68页 附图17页 CN 115433282 A 2022.12.06 CN 115433282 A 1.一种抗CD3抗体变异体， 所述抗CD3抗体包括： 重链可变区和轻链可变区； 所述重链可 变区包括： VHCDR1、 VHCDR2、 VHCDR3； 所述轻链可变区包括： VLCDR1、 VLCDR2、 VLCDR3； 所述抗 CD3抗体的氨基酸序列包括SEQ  ID NO： 29‑34所示的VHCDR1、 VHCDR2、 VHCDR3、 VLCDR1、 VLCDR2和VLCDR3； 其特征在于： 所述抗CD3抗体变异体的突变位点包括以下任意1个或2个以 上位点： SEQ ID NO： 30所示序列的第十位 点， SEQ ID NO： 31所示序列的第二、 七位 点， SEQ ID NO： 33所示序列的第三、 四位 点， SEQ ID NO： 34所示序列的第四、 五、 六、 七位 点。 2.根据权利要求1所述的抗CD3抗体变异体， 其特征在于， 所述的突变是指氨基酸被取 代。 3.根据权利要求1所述的抗CD3抗体变异体， 其特征在于， 变异体的突变位点包括以下 任意1个或2个以上位 点： SEQ ID NO： 30所示序列中第十位的A被取代为E， SEQ ID NO： 31所示序列中第二 位的G被取代为S、 第七位的S被取代为G， SEQ ID NO： 33所示序列中第三 位的N被取代为 W、 第四位的K被取代为 L， SEQ ID NO： 34所示序列中第四位的Y被取代为N或R、 第五位的S被取代为K、 第六位 的N 被取代为G、 第七位的L被取代为G。 4.根据权利要求1所述的抗CD3抗体 变异体， 其特 征在于， VHCDR2的氨基酸序列如SEQ  ID NO:35所示； 或者， VHCDR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO:36所示； 或者， VLCDR2的氨基酸序列如SEQ  ID NO:37或38所示； 或者， VLCDR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO:39、 40或41所示。 5.根据权利要求1所述的抗CD3抗体变异体， 其特征在于， 所述VHCDR1、 VHCDR2、 VHCDR3、 VLCDR1、 VLCDR2和VLCDR3的氨基酸序列如以下任意 一组序列所示： (1)SEQ ID NO： 29、 35、 31、 32、 37、 39； (2)SEQ ID NO： 29、 35、 36、 32、 37、 40； (3)SEQ ID NO： 29、 35、 36、 32、 38、 41。 6.根据权利要求5所述的抗CD3抗体变异体， 其特征在于， 所述抗体变异体的重链可变 区和/或轻链可变区选自SEQ  ID NO： 1、 2或3所示序列的重链可变区和/或轻链可变区， 或与 其具有至少90％序列同一 性。 7.根据权利要求1所述的抗CD3抗体变异体， 其特征在于， 所述重链可变区和所述轻链 可变区之 间具有用于形成二硫键的突变， 所述突变的位点包括以下组合形式中的任意一种 或两种以上， 突变位 点根据EU编号， 所述重链可变区以VH表示， 所述轻链可变区以VL表示：权　利　要　求　书 1/9 页 2 CN 115433282 A 28.根据权利要求1所述的抗CD3抗体变异体， 其特征在于， 所述抗CD3抗体变异体还包 含： 选自人源IgG1、 IgG2、 IgG3、 或IgG4或其变体的重链恒定区； 以及选自人源κ、 λ链或其变 体的轻链恒定区； 所述重链恒定区包 含： Fc片段或其变 体。 9.根据权利 要求1所述的抗CD3抗体变异体， 其特征在于， 所述抗体变异体为scFv， 其包 含重链可变区、 轻链可变区、 以及连接所述重链可变区和所述轻链可变区的连接片段， 所述 连接片段的氨基酸序列优选为若干个G GGGS重复， 更优选为3个G GGGS重复。 10.权利要求1至9中任意一项所述的抗CD3抗体变异体在制备用于抑制或治疗癌症的 药物中的应用。 11.根据权利要求10所述的应用， 其特征在于， 所述癌症选自 以下癌症或发生于以下部 位： 结直肠、 乳 腺、 卵巢、 胰腺、 胃、 前列腺、 肾、 宫颈、 骨髓癌、 淋巴癌、 白血病、 甲状腺、 子宫内 膜、 子宫、 膀胱、 神经内分泌、 头部颈部、 肝、 鼻咽、 睾丸、 小细胞肺癌、 非小细胞肺癌、 黑素瘤、 基底细胞皮肤癌、 鳞状细胞皮肤癌、 隆突性皮肤纤维肉瘤、 梅克尔细胞癌、 成胶质细胞瘤、 胶 质瘤、 肉瘤、 间皮瘤、 以及 骨髓增生异常综合症。 12.一种核酸分子， 其编码权利要求1至9中任意 一项所述的抗CD3抗体 变异体。 13.一种表达载体， 其包 含权利要求12所述的核酸分子 。 14.一种抗肿瘤相关抗原(TAA)/抗CD3的蛋白分子， 其特征在于， 其为异二聚体形式， 包 括第一单体和第二单体； 所述第一单体包括： (a)Fd片段； (b)轻链片段及第一Fc链； 所述第二单体包括： (a)Fd片段； (b)轻链片段、 抗CD3抗体片段以及第二Fc链； 所述轻链片段包括VL结构域和CL结构域； 所述Fd片段包括VH结构域和CH1结构域； 在 所 述第一单体或所述第二单体中， 所述轻链片段与所述Fd片段配对形成抗TAA的Fab结构域； 其中， 所述第一单体的轻链片段与所述第一Fc链融合； 所述抗CD3抗体片段的N端与所述第 二单体的轻链片段融合， C端与所述第二Fc链融合； 或者， 所述第一单体包括： (a)Fd片段； (b)轻链片段、 细胞因子功能 区、 第一Fc链； 所述第二单体包括： (a)Fd片段； (b)轻链片段、 抗CD3抗体片段、 以及第二Fc链； 所述细胞因子功能区包括IL ‑15及IL‑15Ra； 其中， 所述细胞因子功能区的N端与所述第 一单体的轻链片段融合， C端与所述第一Fc链融合； 所述抗CD 3抗体片段的N端与所述第二单 体的轻链片段融合， C端与所述第二Fc链融合；权　利　要　求　书 2/9 页 3 CN 115433282 A 3