(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210618170.0 (22)申请日 2022.06.01 (71)申请人 广州医科 大学附属肿瘤医院 地址 510095 广东省广州市横枝岗路78号 (72)发明人 郑燕芳　蔡睿　 (74)专利代理 机构 广州新诺专利商标事务所有 限公司 4 4100 专利代理师 吴泽燊 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01) A61K 31/713(2006.01) A61K 38/48(2006.01) A61K 48/00(2006.01) A61K 47/64(2017.01) A61K 47/58(2017.01)A61K 47/60(2017.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C07K 7/06(2006.01) C12N 15/113(2010.01) (54)发明名称 靶向肿瘤的光热基因联合治疗纳米系统的 制备方法及应用 (57)摘要 本发明提供一种靶向肿瘤的光热基因联合 治疗纳米系统的制备方法及应用， 涉及生物医药 技术领域。 本发 明的靶向肿瘤的光热基因联合治 疗纳米系统包括以下步骤： 制备纳米金棒： 将金 纳米种子和金棒生长液混合， 生长得到金纳米棒 AuNR； 接枝： 在甲氧基聚乙二醇 ‑聚乙烯亚胺共聚 物上接枝细胞穿膜肽iRGD， 得到mPEG ‑PEI‑iRGD； 复合纳米 金棒： 将mPEG ‑PEI‑iRGD和Au NR混合， 得 到AuNR@mPEG ‑PEI‑iRGD； 复合siCDK7： 将AuNR@ mPEG‑PEI‑iRGD和siCDK7混合， 即得。 本发明的纳 米系统可有效靶向到肿瘤部位， 通过光热和基因 双重影响达到抑制肿瘤增殖的效果。 权利要求书1页 说明书7页 附图4页 CN 114887061 A 2022.08.12 CN 114887061 A 1.一种靶向肿瘤的光热基因联合治疗纳米系统的制备方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： 制备纳米金棒： 将金纳米种子和金棒 生长液混合， 生长得到金纳米棒AuNR； 接枝： 在甲氧基聚乙二醇 ‑聚乙烯亚胺共聚物上接枝细胞穿膜肽iRGD， 得到mPEG ‑PEI‑ iRGD； 复合纳米金棒： 将mPEG ‑PEI‑iRGD和AuNR混合， 得到AuNR@mPEG ‑PEI‑iRGD； 复合siCDK7： 将AuNR@mPEG ‑PEI‑iRGD和siCDK7混合， 得到光热基因联合治疗纳米系统 AuNR@mPEG ‑PEI‑iRGD/siCDK 7； 其中， iRGD的氨基酸序列为： CRGDKGP DC(SEQ ID No.1)； siCDK7的核苷酸序列为： AG GGATCTGAAACCAAACA(SEQ ID No.2)。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述制备纳米金棒步骤具体为： 将十 六烷基三甲基溴化铵和四氯金酸混合， 加入冰冻的硼氢化钠继续混合， 得到金纳米种子； 将 十六烷基三甲基溴化铵和四氯金酸混合， 加入硝酸银和抗坏血酸混合， 得到金棒生长液； 向 生长液中加入盐酸和金纳米种子， 待生长出 金纳米棒AuNR。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述接枝步骤具体为： 将甲氧基聚乙 二醇羧基溶于水， 加 入1‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐酸进行活化， 调节pH为6.8 ～7.2， 加入N ‑羟基琥珀酰亚胺和聚乙烯 亚胺， 反应完成后除杂， 得到mPEG ‑PEI； 将3‑巯基丙 酸溶于水， 加入1 ‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐酸进 行活化， 加入N ‑羟基琥珀酰亚 胺和mPEG ‑PEI， 反应完成后除杂， 得到mPEG ‑PEI‑SH； 将iRGD溶于水， 加入1 ‑(3‑二甲氨基丙 基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸进行活化， 调节pH为6.8～7.2， 加入N ‑羟基琥珀酰亚胺和mPEG ‑ PEI‑SH， 反应完成后除杂， 得到mPEG ‑PEI‑iRGD。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述甲氧基聚乙二醇羧基与聚乙烯亚 胺的质量比为1:(1～1.5)； 所述3 ‑巯基丙酸与mPEG ‑PEI的质量比为1:(15～40)； 所述iRGD 与mPEG‑PEI‑SH的质量比为1:(8～12)。 5.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述除杂的方法为： 用截留分子量为 3500Da的透析袋透析。 6.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述复合纳米金棒步骤具体为： 将 mPEG‑PEI‑iRGD和AuNR混合， 在惰性气体保护下搅拌1 ‑3d， 经离心去除杂质， 得到AuNR@ mPEG‑PEI‑iRGD。 7.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述复合纳米金棒步骤中， 所述AuNR 与mPEG‑PEI‑iRGD的质量比为1:(4～6)。 8.根据权利 要求1～7任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述复合siCDK7步骤中， 所 述AuNR@mPEG ‑PEI‑iRGD和siCDK7的质量比为(15～40):1； 所述AuNR@mPEG ‑PEI‑iRGD和 siCDK7混合后， 置 于20～30℃下孵育20～40mi n， 即得AuNR@mPEG ‑PEI‑iRGD/siCDK 7。 9.一种采用权利要求1～8任一项所述的制备方法得到的靶向肿瘤的光热基因联合治 疗纳米系统。 10.一种权利要求9所述的靶向肿瘤的光热基因联合治疗纳米系统在制备抑制肺癌药 物中的用途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114887061 A 2靶向肿瘤的光热基因联合治疗纳米系统的制备方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医药技术领域， 特别是涉及一种靶向肿瘤的光热基因联合治疗纳 米系统的制备 方法及应用。 背景技术 [0002]肺癌是源于支气管黏膜上皮或肺泡上皮的恶性肿瘤， 大多数肺癌患者年龄在65岁 以上， 但近年 发病有年轻化倾向。 肺癌的发病率和死亡率在众多恶性肿瘤中较高， 晚期肺癌 患者预后欠佳。 临床上常通过手术切除的方式治疗癌症， 并根据病情以及手术效果联合应 用化疗、 放疗、 靶向治疗、 生物免疫治疗等多种治疗方式进行治疗。 虽然这些治疗方法针对 于肿瘤有不 错的治疗效果， 但是会 对患者身体产生极大的损伤。 [0003]在众多治疗手段中， 光热治疗(PTT)因具有时间短、 疗效显著、 毒副作用小等优点 被广泛关注和研究， 并且已有部 分应用于临床中。 PTT的技术原理是将具有光热转换的药材 注入人体， 运用靶向识别技术将其聚集在肿瘤附近， 再通过激光照射将光能转化为热能杀 死癌细胞。 然而现实问题在于， 单独的光热治疗手段难以治愈癌症。 因此， 通常在光热治疗 的前提下， 再 搭配如化疗、 基因治疗等手段进行治疗。 [0004]细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶， 其单体本身并 不具有活性， 必须与相应的细胞周期蛋白结合形成有活性的异二聚体复合物发挥调节作 用， 可催化相应底物磷酸化， 驱动细胞周期各项进程， 依序完成DNA 合成和有丝分裂， 引起细 胞的生长和增殖。 CDK作为细胞周期的关键性激酶， 其生理活性通过与细胞周期蛋白、 CDK激 活激酶和CDK抑制蛋白的相互作用进 行调节。 大量研究表明， 多 数恶性肿瘤的发生和发展均 与细胞周期调控功能紊乱有关， 而CDK的过度活化是其中的重要原因之一。 由于CDK在调节 肿瘤细胞的增殖与凋亡中起关键作用， 通过选择性抑制肿瘤组织中的CDKs活性， 可以对肿 瘤治疗起到积极的作用， 所以对CDK抑制剂的研究已成为肿瘤治疗和开发新型靶向药物的 热点领域。 CDKs可分为两大类： 控制细胞周期的CDKs和细胞转录的CDKs。 CDK7主要与细胞内 遗传信息的转录机制相关， 其与白血病、 三阴性乳腺癌、 小细胞肺癌、 胃癌和神经母细胞瘤 等肿瘤的发生密切相关， 因此， CDK7被认 为是治疗恶性肿瘤的一个潜在药物靶点。 许多CDK7 小分子抑制剂 被报道对多种恶性肿瘤具有良好的抑制作用， 然而这些抑制剂也会导致多种 不良反应的产生。 发明内容 [0005]基于此， 有必要针对上述问题， 本发明提供一种靶向肿瘤的光热基因联合治疗纳 米系统的制备方法， 所得的纳米系统可有效靶向到肿瘤部位， 通过光热和基因双重影响， 达 到抑制肿瘤增殖的效果， 而且可减少或避免化学 药物的使用， 减少不良反应的发生。 [0006]一种靶向肿瘤的光热基因联合治疗纳米系统的制 备方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： [0007]制备纳米金棒： 将金纳米种子和金棒 生长液混合， 生长得到金纳米棒AuNR；说　明　书 1/7 页 3 CN 114887061 A 3