(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210620322.0 (22)申请日 2022.06.01 (71)申请人 海南大学 地址 570100 海南省海口市人民大道58号 (72)发明人 董帅　张宝建　孙鑫　 (74)专利代理 机构 山东重诺律师事务所 372 28 专利代理师 孙玮 (51)Int.Cl. C07K 14/435(2006.01) C07K 1/107(2006.01) C07K 1/06(2006.01) C07K 1/34(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 47/64(2017.01) A61K 47/42(2017.01)A61P 29/00(2006.01) A61P 25/34(2006.01) A61P 25/32(2006.01) A61P 25/36(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 25/00(2006.01) (54)发明名称 一种nAChR受体α3β2亚型抑制失活型阻断 剂、 其制备方法及应用 (57)摘要 本发明公开一种nAChR受体α3β2亚型抑制 失活型阻断剂、 其制备方法及应用， 属于生物技 术领域。 本发明通过对α ‑芋螺毒素中的2,4位二 硫键进行连接子插入修饰， 以丧失α ‑芋螺毒素 对nAChR受体α3β2亚型抑制活性， 并保持对 nAChR受体其它亚型的抑制活性。 α ‑芋螺毒素被 改造后， 表现为对其它nAChR受体亚型的选择性 增强， 提高了α ‑芋螺毒素本身的特异性， 使α ‑ 芋螺毒素相对特异性地作用于nAChR受体其它亚 型， 而不受α3β2亚型被抑制后所带来的不可预 期的副作用干 扰。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 114853864 A 2022.08.05 CN 114853864 A 1. α‑芋螺毒素2,4位二硫键修饰在制备nAChR受体α3β2亚型抑制失活型阻断剂中的应 用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述2,4位二硫键修饰为： 在2,4位二硫键 中插入连接骨架。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述连接骨架选自间二甲苯基、 邻二甲苯 基或对二甲苯基。 4.一种nAChR受体α 3β 2亚型抑制失活型阻断剂， 其特征在于， 所述阻断剂为对α ‑芋螺毒 素2,4位二硫键进 行修饰后所获得的产物肽， 其中， 所述修饰为， 在2,4位二硫键中插入连接 骨架。 5.权利要求 4所述阻断剂的制备 方法， 其特 征在于， 步骤如下： 在室温条件下， 将1,3位二硫键被Acm保护基保护的α ‑芋螺毒素线性肽置于反应溶剂 中， 通入保护气体， 然后将小分子化合物溶液滴加至反应体系中， 密封混合反应1h； 待反应 完成后， 调节反应液至酸性， 然后用水稀释， 将乙腈含量降低至10％以下， 至溶液变成浑浊， 有白色物质悬浮， 未参加反应的小分子化合物在低浓度有机溶液条件 下析出， 过滤除沉淀， 纯化溶液， 获得α ‑芋螺毒素2,4位二硫键被修饰的产物。 将反应产物置于强酸条件下， 进行 碘氧化， 脱除Acm保护基， 1,3位巯基连接形成二硫键， 经纯化后获得nAChR受体α 3β 2亚型抑 制失活型阻断剂。 6.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 所述反应溶剂为碳酸氢铵的乙腈水溶 液， 其中， 反应溶剂的具体组成为： 5％NH4HCO3:60％ACN:3 5％H2O， v:v:v， pH 选自8.0～8.2。 7.根据权利要求5所述的制备 方法， 其特 征在于， 保护气体选自氮气或氩气。 8.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 小分子化合物溶液选自小分子化合物 的乙腈溶 液， 其中， 所述小分子化 合物选自间二溴苄、 邻二溴苄或对二溴苄。 9.权利要求4所述阻断剂在制备特异性阻断非α3β2亚型的nAChR受体其它亚型的药物 中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114853864 A 2一种nAChR受体 α3β2亚型抑制失活 型阻断剂、 其制备方 法及 应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种nACh R受体α 3β 2亚型抑制失活型阻断剂、 其制备方法及应用。 背景技术 [0002]乙酰胆碱受体(nACh R)是由5个亚基组成的同源或异源跨膜五 聚体， 能够参与介导 学习、 感觉、 疼痛 等等多种神经信号传导。 nAChR受体包括肌肉型或神经型两大类， 广泛分布 于中枢、 外周神经系统以及肌肉中。 神经型nAChR受体由12种亚基( α2 ‑α 7、 α9、 α 10及β 2 ‑β 4) 组成， 而肌肉型nAChR 由5种亚基( α 1、 β 1、 γ、 δ、 ε )组成。 nAChR受体是筛选、 诊断和治疗一大 类重要疾病的关键靶点， 这些疾病包括疼痛、 烟酒和毒品成瘾、 乳腺癌、 肺癌以及中枢神经 紊乱等。 [0003]α‑芋螺毒素是人们最早发现且研究最多的一大类芋螺毒素。 α ‑芋螺毒素一级结构 一般由10 ‑30个氨基酸残基组成， 含有四个 半胱氨酸(Cys I‑IV)， 其大部分半胱氨 酸框架为 I型框架， 即CCXmCXnC(X代表氨基酸残基， m和n代表数量 )， 通常以CysI ‑CysIII， CysII ‑ CysIV的形式形成两对二硫键。 根据m和n的不同， 又可将α ‑芋螺毒素分为3/5、 3/6、 4/2、 4/3、 4/4、 4/5、 4/6、 4/7、 4/8等亚家族。 截止2019年， 已知的I型框架芋螺毒素共有691个， 其中以 4/7型最多， 3/5型次之。 α ‑芋螺毒素对nAChR各种亚型具有较好的抑制作用。 因此， α ‑芋螺毒 素是研究nAChR各种亚型精细结构和生理药 理功能的宝贵分子探针， 且还 是治疗nAChR受体 相关疾病的新药来源。 [0004]nAChR受体具有多种亚型， 不同nAChR受体亚型参与生物体中不同的神经生理和病 理过程。 因此， 在药物以及分子探针的开 发中， 发现高效、 特异性作用于nAChR某 一亚型的抑 制剂具有重要意义。 nAChR受体α 3β 2亚型在生物体内分布广泛， 从背根神经节、 脊髓到自主 神经节神经元等均有表达。 α ‑芋螺毒素在阻断其它受体亚型的同时， 也会致使α 3β 2亚型被 阻断， 从而带来不可预期的副作用。 因此， 如何改造α ‑芋螺毒素使其对α 3β 2亚型的抑制活性 降低或丧失， 并对其它亚型保持特异的抑制活性， 具有重要意 义。 发明内容 [0005]本发明尝试对GIC、 [A10L]PnIA、 LtIA以及LsIA等4/7型α ‑芋螺毒素的二硫键进行 修饰， 即在二硫键中插入连接骨架， 通过研究发现， 1,3位二硫键的修饰产物丧失对所有 nAChR受体亚型的活性， 而多种2,4位二硫键的修饰产物则在丧失对nAChR受体α 3β 2亚型阻 断活性的基础上， 保持对其它受体亚型的阻断活性。 其中， 所述nAChR受体其它亚型包括但 不限于α 2β 2、 α 2β 4、 α 3β 4、 α 4β 2、 α 4β 4、 α 6 /α 3β 4、 α 6 /α 3β 3β 2、 α 7、 α 9α 10、 α 1β 1δ ε。 [0006]为此， 本发明提供了如下技 术方案： [0007]α‑芋螺毒素2,4位二硫键修饰在制备nAChR受体α3β 2亚型抑制失活型阻断剂中的 应用。说　明　书 1/7 页 3 CN 114853864 A 3