ICS 65.020.01 B23 DB4228 恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 地 方 标 准 DB 4228/T 57—2021 甘薯脱毒种薯规范化生产技术规程 Technical specification for standardized production of virus-free tubers of sweet potato 2021 - 01 - 28 发布 2021 - 04 - 28 实施 恩施土家族苗族自治州市场监督管理局 发 布 DB4228/T 57—2021 目 录 前言..................................................................................................................................................................... II 1 范围................................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件............................................................................................................................................. 1 3 术语和定义..................................................................................................................................................... 1 4 脱毒组培苗快繁............................................................................................................................................. 2 5 水培壮苗生产................................................................................................................................................. 3 6 原原种生产..................................................................................................................................................... 4 7 原种生产......................................................................................................................................................... 5 8 生产用种生产................................................................................................................................................. 5 附录 A（资料性附录） MS 培养基贮备液的配制.......................................................................................... 6 附录 B（资料性附录） 水培营养液贮备液的配制....................................................................................... 7 I DB4228/T 57—2021 前  言 本标准按GB/T 1.1-2020给出的规则起草。 本标准附录A、附录B为资料性附录。 本标准由恩施土家族苗族自治州农业科学院提出并归口管理。 本标准主要起草单位：恩施土家族苗族自治州农业科学院、湖北恩施中国南方马铃薯研究中心、恩 施土家族苗族自治州农业技术推广中心、湖北清江种业有限责任公司、来凤三丰时代农业有限公司、巴 东县神峰薯业开发有限公司。 本标准主要起草人：程群、瞿勇、徐怡、陈巧玲、叶兴枝、沈艳芬、高剑华、李求文、杨国才、郝 苗、宋威武、王甄、张等宏、闫雷、陈火云、陈家吉、杨晓华、张良、尹鑫、谷勇、赵锦慧、李雪晴、 曾珍。 II DB4228/T 57—2021 甘薯脱毒种薯规范化生产技术规程 1 范围 本规程规定了甘薯脱毒组培苗的术语及定义、脱毒组培苗快繁、水培壮苗生产、原原种生产、原种 生产及生产用种生产等。 本规程适用于恩施州甘薯脱毒种薯的标准化生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标 准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于该标准。 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 15618 土壤环境质量标准 NY/T 402 脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测技术规程 NY/T 1200 甘薯脱毒种薯 NY/T 3537 甘薯脱毒种薯（苗）生产技术规程 3 术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 脱毒组培苗 virus-free tissue culture plant 简称脱毒苗，是应用茎尖组织培养技术获得的、经检测确认不带甘薯羽状斑驳病毒（Sweet potato feathery mottle virus, SPFMV）、甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus, SPLV)、甘薯黄矮病毒（Sweet potato yellow dwarf virus C, SPYDV）、甘薯明脉病毒（Sweet potato veinc-learing virus G, SPVCV）、甘 薯轻斑驳病毒（Sweet potato mild mottle virus, SPSMV）的试管苗。 3.2 水培壮苗 hydroponic seedling 脱毒组培苗切段在温室扦插成活，剪取其主茎及侧枝两叶一心扦插成活的苗。 3.3 脱毒种薯 virus-free seed roots 从繁殖脱毒苗开始，通过生产水培苗经逐代繁殖增加种薯数量的种薯生产体系生产出来的各级种薯。 脱毒种薯分为原原种、原种和生产用种。 3.4 原原种 pre-elite 利用组培苗及水培苗在温室条件和 60 目防虫网室下生产的符合 NY/T 1200 的种薯。 3.5 原种 elite 1 DB4228/T 57—2021 用原原种作种薯，在大于 500m 隔离条件下生产的符合 NY/T 1200 的种薯。 3.6 生产用种 certified seed 用原种作种薯，在大于 500m 隔离条件下生产出的符合 NY/T 1200 的种薯。 4 脱毒组培苗快繁 4.1 外植体处理 选择经过品种登记且适宜本地区大面积推广的高产优质或具有区域特殊用途的甘薯品种，质量符合 NY/T 1200 的要求。将选取的薯块在温室育苗，当苗高 20 cm 左右，选取茎顶端 2 cm 长芽段，剪去肉 眼可见叶片，用自来水冲洗 30 min，经 70%酒精浸泡 25 s，再用 0.1%氯化汞溶液消毒 30 s ，5%次氯 酸钠溶液消毒处理 10 min，无菌水冲洗 3 遍。 4.2 茎尖分生组织培养 4.2.1 培养基的制备 在每l000 ml MS培养基(见附录A)中加GA3 0.5 mg、6-BA 0.5 mg、IAA 0.1 mg分装入管。 4.2.2 茎尖拨离接种 在超净工作台上体视显微镜下用手术刀等工具剥去幼叶，切取带l～2个叶原基（约0.2 mm～0.4 mm） 的茎尖,接种到MS加激素的培养基试管中，每管放1个茎尖，注明品种，茎尖号，接种日期。 4.2.3 组织培养 在温度28℃、光照16h/d、光照强度2000～3000Lx的条件下培养。25d后茎尖愈伤组织形成，转入广 口瓶MS无激素培养基上继续培养50d～60d，当幼苗长出5～7片叶时，进行扩繁。 4.3 病毒检测 采用症状学诊断法、酶联免疫吸附检测法、指示植物检测法检测病毒，根据检测结果出具检验报告， 脱毒组培苗未检出甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）、甘薯潜隐病毒(SPLV)、甘薯黄矮病毒（SPYDV）、 甘薯明脉病毒（SPVCV）、甘薯轻斑驳病毒（SPSMV）等病毒则批准进行组培苗生产。 4.3.1 目测法 先用症状学诊断法全面观察组培茎尖苗的长势长相,将长势弱,叶片黄化、黄脉和花叶等症状明显的 带毒苗淘汰去除。 4.3.2 酶联免疫吸附检测法 当单株的试管苗长至展开叶达6片以上时检测，按株取其上、中、下部叶片用于酶联免疫吸附检测。 用酶联免疫检测法初检后，淘汰显阳性反应的单株。检测方法参照NY/T 402执行。 4.3.3 指示植物检测法 通过酶联免疫检测的健康植株继续扩繁，再用指示植物检测法将生长可疑的茎尖苗嫁接在巴西牵牛 上，15 d后观察结果。检测方法参照NY/T 402中指示植物检测法进行。 2 DB4228/T 57—2021 4.3.4 脱毒苗复检 随机抽取1 %～2 %脱毒试管苗再次检测，经酶联免疫法检测淘汰阳性反应株后，再经指示植物检 测确无症状后，可用于扩大繁殖，检测方法参照NY/T 402测定。 继代扩繁中选的脱毒苗，每年至少作一次病毒复检。 4.4 组培苗继代增殖培养 经过病毒检测无病毒的试管苗，在无菌条件下按1叶1节切段，移入装有MS培养基的广口瓶中，在温 度28℃，光照16h/d，光照强度2000～3000Lx条件下培养。经3d～5d腋芽萌发，30d后长成5～7片叶的成 苗。可以连续切段增殖培养，繁殖系数3～5倍。 5 水培壮苗生产 5.1 温室消毒 用二氧化氯