ICS 65.020.20 B 21 浙 江 DB3301 省 杭 州 市 地 方 标 准 DB 3301/T 1081—2018 三叶青种苗生产技术规程 2018 - 06 - 20 发布 杭州市质量技术监督局 2018 - 07 - 20 实施 发 布 DB3301/T 1081—2018 前  言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由杭州市农业局提出并归口。 本标准起草单位：杭州中泽生物科技有限公司、杭州万向职业技术学院、浙江省中药研究所、浙江 大学。 本标准主要起草人：陈加红、李梦君、沈晓霞、沈斌斌、吴殿星、周志丹、杨峰。 I DB3301/T 1081—2018 三叶青种苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了三叶青种苗生产的术语定义、扦插繁殖场地选择和准备、扦插育苗、组培育苗、病虫 害防治、出圃、档案管理、模式图等。 本标准适用于三叶青种苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB/T 8321 农药合理使用准则 GB 15618 土壤环境质量标准 NY/T 1276 农药安全使用规范总则 3 术语和定义 下列术语和定义用于本标准。 3.1 三叶青 又名三叶崖爬藤（学名：Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg），葡萄科多年生草质藤本， 块根入药。 3.2 母本株 生长健壮，作为营养繁殖材料采集对象的三叶崖爬藤植株。 3.3 组培苗 利用侧芽作为外植体，采用组织培养技术生产的种苗。 4 产地选择及准备 4.1 产地环境 产地土壤环境应符合GB 15618规定的二级标准；空气质量应符合GB 3095规定的二级标准；灌溉水 质应符合GB 5084规定的二级标准。 4.2 温室育苗 1 DB3301/T 1081—2018 扦插及组培苗移植通常选择在配备各类移动苗床的温室中进行，如无移动苗床，地面需覆盖园艺地 布。遮光率为50%～60%。 4.3 露地育苗 露地育苗场地表面应平整无杂草，覆盖园艺地布，搭建荫棚，其上覆盖遮光率为50%～60%的遮阳网。 5 扦插育苗 5.1 扦插基质 以70%园土+20%泥炭+10%草木灰作扦插基质，加施基质量1.5%～2.5%的腐熟有机肥或缓释肥作基肥， 充分拌匀，消毒。扦插前装入50孔穴盘，压紧。 5.2 扦插时间 3月上旬～6月中旬，10月上旬～11月下旬。 5.3 插穗选择 在母本株上选择二年生健壮枝条，斜剪成2节～3节、8㎝～10㎝长的插穗，上部留1叶。 5.4 插穗处理 扦插前用甲基托布津（70粉剂）500倍液浸泡插穗全株1h～2h,然后用IBA 500㎎/L浸泡插穗基部1min 后马上扦插。 5.5 扦插方法 将插穗斜插入穴孔，每穴1株，入土深度为技条的1/3～1/2，插后压紧，浇透水。 5.6 插后管理 5.6.1 浇水 扦插后35d～40d生根出叶前，每天喷水（浇水）1次～2次，保持基质潮湿。生根后减少浇水次数， 增加单次浇水量。 5.6.2 保温保湿 可在穴盘上方搭建小拱棚，保持60%～80%的空气相对湿度和15℃～25℃温度。 5.6.3 施肥 扦插后20d，每隔15d喷施1次浓度为0.3%磷酸二氢钾肥液，一般喷施3次～4次。 5.6.4 炼苗 扦插后60d～80d，视根系及枝叶生长情况，分次逐步延长通风时间、提高光照强度，最后达到栽培 正常条件。 6 组培育苗 2 DB3301/T 1081—2018 6.1 组培流程 外植体选取——外植体消毒——外植体切段——初代培养——增殖培养——生根培养——炼苗— —组培苗移植 6.2 外植体的获得和处理 6.2.1 外植体的选取 选择无病虫害、无病毒侵染的生长健壮的当年生嫩枝。 6.2.2 外植体的消毒 将采取的外植体嫩枝，用洗涤剂水刷洗，经自然水冲洗干净。在超净工作台上，将外植体嫩枝先放 入75%的乙醇溶液中浸泡10s后，用无菌水洗净，再放入0.1%HgCl2或2%次氯酸钠溶液中消毒10min～20min 后，用无菌水冲洗3次～5次。 6.2.3 外植体的切段 在超净工作台上，用火焰灭菌的解剖刀、镊子将嫩枝均匀切分成长0.8cm～1.0cm的小段，每段含1 个腋芽，接种于事先准备好的诱导培养基中，每瓶5株～10株。芽朝上插入培养基中。 6.3 初代培养 6.3.1 初代培养基 基本培养基为MS培养基。植物激素为：0.3 mg/L～0.5mg/L浓度的苄氨基腺嘌呤（6-BA）；0.01mg/L～ 0.05mg/L浓度的萘乙酸(NAA）。 6.3.2 培养条件 培养温度为25℃±2℃。前期暗培养，待有芽萌发后光照强度3000lx～5000lx培养，光照时间为10 h/d～12h/d，待组培苗生长满瓶后再增殖培养。 6.4 增殖培养 6.4.1 增殖培养基 基本培养基为MS培养基。植物激素为2.0 mg/L～4.0mg/L浓度的苄氨基腺嘌呤（6-BA）；0.1 mg/L～ 0.3mg/L浓度的萘乙酸(NAA）。 6.4.2 培养条件 培养温度为25℃±2℃。光照强度3000lx～5000lx，光照时间为10 h/d～12h/d。待组培苗生长至大 于2cm后，可以将小苗切断进行生根培养。 6.5 生根培养 6.5.1 生根培养基 基本培养基为1/2MS培养基。植物激素为0.5mg/L～2.0mg/L浓度的吲哚丁酸（IBA）。 6.5.2 培养条件 3 DB3301/T 1081—2018 培养温度为25℃±2℃。光照强度3000 lx～5000lx，光照时间为10 h/d～12h/d。待组培苗生长至 大于5cm后，可以将小苗移至温室进行炼苗。 6.6 炼苗 移植前，将培养瓶放置在温室自然散射光下，封口炼苗3d～7d。然后再开口炼苗3d～7d，开口炼苗 时可在培养基表面洒薄薄一层水，温度控制在25℃±3℃。 6.7 组培苗移植 6.7.1 基质 以60%泥炭土+40%珍珠岩作移栽基质，要求疏松透气且有一定肥力。调节pH值至5.5～6.0。 6.7.2 移栽 炼苗完成后，加水将培养基打散倒出，再将小苗清洗干净后，栽植于穴盘中。 6.8 移植后的管理 6.8.1 水分管理 移栽时浇足水，以后每2d～3d淋水一次。2周～3周后，相对湿度控制在80%～90%，当第一片新叶完 全张开后，降低湿度至60%～70%。 6.8.2 光照和温度管理 移栽后，光照强度控制在2000lx～3000lx。整个育苗期，温度宜控制在15℃～30℃之间。 6.8.3 施肥 移栽后第4周～8周，每周喷施1次浓度为0.3%磷酸二氢钾肥液。 7 病虫害防治 三叶青苗期病虫害较少，可通过降低湿度、加强通风、保持生产环境清洁等方法防治病害；可采用 杀虫灯、沾虫板、防虫网减轻虫害。如有必要也可采取药剂防治，使用农药应符合NY/T 1276和GB/T 8321 的规定。 8 出圃 组培苗移栽培育80d～100d，扦插苗完成炼苗后，新根5条以上，平均根长超过3㎝，新叶3片～5片 以上，植株生长健壮、无病虫害、叶色翠绿即可出圃。 9 档案管理 9.1 生产单位应完整保存真实的产地环境质量资料、管理和销售记录。 9.2 管理和销售记录包括投入物品品种、来源、数量、购买时间和地点、使用方法、使用时间、生产 管理操作时间与方法、操作人员、种苗出圃时间及销售情况等。 4 DB3301/T 1081—2018 10 模式图 三叶青种苗生产技术规程模式图参见附录A、附录B。 5 DB3301/T 1081—2018 附 录 A （资料性附录） 三叶青种苗生产技术规程模式图(扦插育苗) 三叶青种苗生产技术规程模式参见图A.1。 图 A.1 三叶青种苗生产技术规程模式图(扦插育苗) 6 DB3301/T 1081—2018 AB 附 录 B （资料性附录） 三叶青种苗生产技术规程模式图(组培育苗) 三叶青种苗生产技术规程模式 (组培育苗)参见图B.1。 图 B.1 三叶青种苗生产技术规程模式图(组培育苗) 7 DB3301/T 1081—2018 _________________________________ 8