ICS 65.020.30 CCS B 44 DB 51 四 川 省 地 方 标 准 DB51/T 2758—2021 实验用小型猪 遗传质量控制 Genetic quality control of Experimental miniature pig 2021 - 02 - 10 发布 四川省市场监督管理局 2021 - 03 - 01 实施 发 布 DB51/T 目 5 —2021 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 遗传分类及命名 .................................................................... 1 5 繁殖 .............................................................................. 2 6 遗传质量监测 ...................................................................... 3 I DB51/T 前 5 —2021 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由四川省科学技术厅提出、归口并解释。 本文件起草单位：四川省农村科技发展中心、四川大学实验动物中心、四川省医学科学院•四川省 人民医院实验动物研究所。 本文件主要起草人：王敬东、陈兵、尹海林、邹弈星、王峥屹、彭旭。 本文件首次发布。 II DB51/T 5 —2021 实验用小型猪 遗传质量控制 1 范围 本文件规定了实验用小型猪的遗传分类及命名、繁殖、遗传质量监测的要求。 本文件适用于实验用小型猪的遗传质量控制。 2 规范性引用文件 下列文件的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 14923 实验动物 哺乳类实验动物的遗传质量控制 NY/T 1673 畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实验用小型猪 experimental miniature pig 经人工饲养与培育，对其携带微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，12月龄体重 小于50kg，用于科学研究、教学、生产、检验检测以及其它科学实验的小型猪。 3.2 近交系 inbred strain 经连续20代及以上的全同胞或亲子近交方式培育而成，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或 以后代数的一对共同祖先。近交系的近交系数（inbreeding coefficient）应大于98.6%。 3.3 封闭群 closed colony 以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个动物种群，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖 4代以上的群体。 4 遗传分类及命名 4.1 遗传分类 根据遗传特点的不同，实验用小型猪分为近交系和封闭群。 4.2 命名 4.2.1 近交系命名 1 DB51/T 5 —2021 根据动物的来源、历史和培育经过，以一系列字母和数字作为品系代码（strain code）来表示。 近交系动物通常以一个或数个大写英文字母表示（见示例1），也可以采用大写英文字母加数字命名（见 示例2）。 示例1： A DBA 示例2： C57BL C3H 4.2.2 近交代数 近交系的近交代数用大写英文字母F表示。 示例1：当一个近交系的近交代数为30代时，写成(F30)。 4.2.3 其他近交系 亚系、重组近交系、同源突变近交系、同源导入近交系的定义和命名按照GB 14923执行。 4.2.4 封闭群命名 封闭群命名按照GB 14923执行。 5 繁殖 5.1 近交系的繁殖 5.1.1 原则 保持近交系实验用小型猪的同基因性及基因纯合性。 5.1.2 引种 应选择来自于近交系的基础群，遗传背景明确，来源清楚，有包括品系名称、近交代数、遗传基因 特点及主要生物学特征等的完整档案。 5.1.3 方法 当近交系实验用小型猪生产供应数量不是很大时，一般不设血缘扩大群，仅设基础群和生产群。基 础群、血缘扩大群和生产群的具体繁殖方式按照 GB 14923 执行。 5.2 封闭群的繁殖 5.2.1 原则 保持封闭群实验用小型猪的遗传异质性及基因多态性，避免近交系数随繁殖代数增加而过快上升。 5.2.2 引种 5.2.2.1 应遗传背景明确，来源清楚，有较完整的档案（包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要 生物学特征等）。 2 DB51/T 5 —2021 5.2.2.2 根据繁殖方式，在保证每代近交系数增量不大于 1％的前提下，决定最小引种规模。宜采用 循环交配方式，引种数量不应少于 13 对无血缘关系（三代以内无共同祖先）的种猪；也可采用随机交 配方式，引种数量不应少于 25 对无血缘关系的种猪。 5.2.3 方法 具体繁殖方法按照GB 14923执行。 6 遗传质量监测 6.1 监测方法 采用微卫星DNA标记检测方法。具体方法按照NY/T 1673执行，各微卫星DNA标记的染色体位置、等 位基因数、等位基因片段范围、引物序列、荧光标记、退火温度、镁离子浓度等见表1。 表1 各微卫星 DNA 分子标记检测条件列表 分子标 染色体 记名称 位置 等位 等位基因 基因数 片段范围 （个） （bp） 荧光 标记 S0155 1 7 148-164 FAW S0010 2 9 102-124 FAW SW349 3 21 148-184 FAW S0001 4 6 175-189 FAW S0005 5 10 200-248 FAW S0087 6 17 161-220 FAW S0101 7 13 196-230 FAW S0225 8 7 170-194 HEX SW174 9 5 123-136 TAMRA SW1626 10 14 117-170 FAW 退火 引物序列 5’→3’ 温度 （℃） F-TGTTCTCTGTTTCTCCTCTGTTTG R-AAAGTGGAAAGAGTCAATGGCTAT F-TTAACATGGCTGTCTGGACC R-GTCCCTGTCCAACCATAAGA F-CCTGTTGTAGGCTCCATGAG R-CTAGGAGTCGGCCCTGAAC F-TGGATGGGTCTCATTCTCAG R-TGATTCCTAGCCTGAGAAGC F-TCCTTCCCTCCTGGTAACTA R-GCACTTCCTGATTCTGGGTA F-GACAAGCTCCAGGAAGCTTTCCTG R-ATTGCCTTGTGATCCCAAGGGGCA F-GAATGCAAAGAGTTCAGTGTAGG R-GTCTCCCTCACACTTACCGCAG F-GCTAATGCCAGAGAAATGCAGA R-CAGGTGGAAAGAATGGAATGAA F-GCCAAAATAGCTATTGGACAGC R-TCATGCTATTTTGTTCCAGATG F-GCCAATTTCTAGCAAAGTGACC R-TGGAAGATGACATAAGAAAGGG 镁离 子浓 度 (mM) 58 1.5 60 1.5 62 1.5 50 1.5 55 3.0 58 1.5 58 1.5 58 1.5 58 1.5 62 1.5 3 DB51/T 5 —2021 表 1 各微卫星 DNA 分子标记检测条件列表（续） 等位 等位基因 基因数 片段范围 （个） （bp） 11 9 96-133 FAW SW605 12 5 109-135 TAMRA SW769 13 7 104-139 HEX SW857 14 6 134-160 TAMRA 分子标 染色体 记名称 位置 S0009 荧光 引物序列 5’→3’ 标记 F-AAACATACCAAGAAGCCCAG R-TAATCTTTGCCATCCCTTGT F-AGCCTTCTGTGCAGAAAAGC R-CCCCAGGTTCTCTGCTCTC F-GGTATGACCAAAAGTCCTGGG R-TCTGCTATGTGGGAAGAATGC F-TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC R-GATCCTCCTCCAAATCCCAT 退火 镁离子 温度 浓度 （℃） (mM) 62 1.5 58 1.5 55 3.0 55 1.5 55 3.0 58 1.5 58 1.5 55 1.5 62 1.5 F-TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGAT S0355 15 14 243-277 HEX G R-TTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA S0026 16 5 90-111 FAW S0332 17 24 111-168 FAW SW1984 18 21 95-158 FAW SW2476 X 6 88-106 TAMRA F-AACCTTCCCTTCCCAATCAC R-CACAGACTGCTTTTTACTCC F-TGGTTTCCTCACCAAGACAAGTAC R-CCCAAGGAGCTACAGCAAGGCAAG F-TTTTTAGTGTCCAAGGAGGTCC R-GGAGCACTAATAGACCACCACC F-CT