ICS 65.150 B 51 DB3302 浙 江 省 宁 波 市 地 方 标 准 DB 3302/T 162—2018 海洋微藻饵料规模化培养技术规范 2018 – 06 – 21 发布 宁波市质量技术监督局 2018 – 06 – 21 实施 发 布 DB3302/T 162—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由宁波市海洋与渔业局提出。 本标准由宁波市水产标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：宁波甬盛水产种业有限公司、宁波市海洋与渔业研究院、浙江万里学院、宁波大 学。 本标准主要起草人：申屠基康、董迎辉、林志华、徐继林、何琳、沈庞幼、姚韩韩、陈彩芳。 I DB3302/T 162—2018 海洋微藻饵料规模化培养技术规范 1 范围 本标准规定了等鞭金藻（Isochrysis galbana）、亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)、牟 氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）、三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum）等水产育苗和养殖 生产用海洋微藻饵料规模化培养的设施设备和条件、藻种选择与培养液配制、保种与培养、日常管理、 收获与保存。 本标准适用于海洋微藻饵料规模化培养，其它单胞藻培养可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 11607 渔业水质标准 NY 5362 无公害食品 海水养殖产地环境条件 SC/T 2047 水产养殖用海洋微藻保种操作技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 一级培养 藻类的保种和初级扩种培养阶段。在无菌保种室中，用500ml～5000ml三角烧瓶作培养容器，用消 毒纱布和纸张封口，每天2次～4次摇晃震荡进行培养。营养盐为分析纯级别。 3.2 二级扩种培养 藻类的二级扩种培养阶段，用于生产培养接种。用50L～100L白塑料桶或尼龙袋封闭式培养，培养 期间连续充气。营养盐为化学纯级别。 3.3 三级生产性培养 2 2 藻类的生产性培养阶段，用于供给育苗中的饵料。一般用面积为20m ～40m 的培养池，蓄水高度为 80cm～100cm。营养盐为化学纯或工业纯级别。 3.4 一次性培养 指在一定的容器中，根据藻类的营养需要加入特定的培养液并接种，在适宜的环境条件下培养，当 藻类细胞生长繁殖达到一定密度后，一次全部收获或进一步扩大培养。 3.5 半连续培养 1 DB3302/T 162—2018 指当培养的藻细胞达到一定密度时，根据藻类的生长状态和育苗需求量收获一部分浓藻液，并补充 等量的新培养液继续培养。 3.6 连续培养 指在室内培养容器中封闭式培养，采用自动控温、人工光源、充气培养条件，不断取出达到一定密 度的藻细胞培养液，同时加入等量新的培养液的培养方法。 4 设施、设备和条件 4.1 保种室 2 2 2 2 用于保存和培养高浓度微藻藻种。一般以20m ～30m 为宜，室内保持清洁卫生，严格消毒。要求采 光好，并配备人工光源和空调等保温设施，还应配显微镜、冰箱、藻种培养架及常用仪器、药品试剂等。 4.2 清洗消毒间 用于清洗和消毒培养容器与器材。一般以15m ～20m 为宜，配有清洗水槽、消毒池、恒温烘箱、电 炉或炉灶等。 4.3 扩种室（棚） 用于对一级藻种进一步扩种培养。要求采光通风良好，配备遮光帘或遮阳布等条件设施，以调节光 2 照。按照100m 三级池配备80个～120个白塑料桶或150个～200个尼龙袋。 4.4 海水消毒池 用于消毒经沉淀、沙滤处理后的海水。海水消毒池体积与饵料培养池体积比在1：5～1：10。 4.5 三级生产性培养池 用于提供水产苗种生产及养殖所需要的海水微藻饵料培养。三级饵料培养池的规格以2种～3种为 3 3 3 3 宜，小的容积为10m ～15m 、大的容积为20m ～35m ，形状一般为长方形，培养池深度80cm～100cm饵料 培养水体与育苗水体的比例以1:1.5～1:2为宜。 4.6 水质条件 水质应符合GB 11607和NY 5362要求。 5 藻种选择和培养液配制 5.1 藻种选择 要求藻种繁殖率高、增殖速度快、耐高温。用于贝类育苗生产的藻种，一般可选择等鞭金藻、牟 氏角毛藻、亚心形扁藻、三角褐指藻等种类。 5.2 培养液配制 培养液配制方法见表A.1。 5.3 最适培养条件 2 DB3302/T 162—2018 最适培养条件见表A.2。 6 保种与培养 6.1 培养工具、设施与海水的消毒 6.1.1 工具消毒及方法 6.1.1.1 煮沸消毒 适于充气管、玻璃器皿等小型容器和工具的消毒，消毒时在水中加1%碳酸钠效果更好。充气管、散 气石煮沸消毒10min～15min；锥形瓶内应加少量淡水，置电炉上加热煮沸10min～15min，大型锥形瓶消 毒应在瓶口上放一玻璃漏斗或培养皿，消毒完毕后用消毒的纸或纱布包扎瓶口。 6.1.1.2 酒精消毒 适于中小型容器和工具的消毒，用纱布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹5min后，用消毒水冲洗2 次。 6.1.1.3 漂白粉消毒 将有效氯含量为28%～32%的漂白粉配置成0.02%～0.04%水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡0.5h， 再用消毒水冲洗3次～4次。 6.1.1.4 高锰酸钾消毒 －6 将容器、工具等浸泡在新配的500×10 g/ml高锰酸钾溶液中5min，然后用消毒水冲洗2次～3次。 对玻璃钢水槽、水泥池等消毒，可用0.05%浓度的高锰酸钾溶液泼在池壁上，泼洒两遍后刷洗池底，10min 后再用消毒水冲洗干净。 6.1.2 海水消毒 6.1.2.1 一级保种用水消毒 洁净砂滤海水经过脱脂棉过滤、加热煮沸，冷却后使用。 6.1.2.2 二级扩种用水消毒 洁净砂滤海水经过煮沸消毒或次氯酸钠消毒后使用。 6.1.2.3 三级生产性培养用水消毒 用30mg/kg～50mg/kg漂白粉消毒6h～8h，以漂白粉用量1/3的硫代硫酸钠中和余氯，曝气2h后使用。 6.2 保种 按照SC/T 2047的规定执行。 6.3 一级培养 根据不同培养藻种，适时加入配制好的培养液，参照图A.2调节温度、光照等培养条件。 6.4 二级培养 3 DB3302/T 162—2018 6.4.1 接种时间 接种时间为上午7点～9点，最好为晴天。 6.4.2 培养方法 白塑料桶洗净后，倒入消毒过的洁净过滤海水至桶的2/3 以上。接好消毒过的充气管和气石，按 比例加入培养液，接入藻种，桶口盖上尼龙薄膜，进行通气培养。 6.5 三级生产性培养 6.5.1 培养条件 2 根据藻种要求调控培育室温，自然光照结合人工光源调节光照度。按2m 布一个充气头，保持培养 藻液均匀悬浮。 6.5.2 培养方式和方法 开放式，一次性培养或半连续培养。水温低于25℃时，采用连续培养方法；水温高于25℃时，采用 一次性培养的方法。 6.5.3 接种 把二级扩种培养的藻液接入生产性培养池的培养液中。外观藻液颜色正常、无大量沉淀和明显附壁 现象。一般加入藻种与培养液的比例为1:3～1:6。 接种时间为上午7点～9点。金藻、扁藻等细胞在水层中分布均匀，接种温差不大，光照适合，接种 时间可放宽。 7 日常管理 7.1 观察与处理 每天上、下午定时观察藻液颜色、运动情况，有无附壁、沉淀、菌膜和敌害生物现象。生长良好时， 等鞭金藻呈金褐色，牟氏角毛藻为金黄色，亚心形扁藻为鲜绿色，三角褐指藻为深褐色；有浮游能力种 类上浮活波呈烟雾状，无浮游能力种类均匀悬浮于水中。如有异常立即清除，及时接种培养补充空缺的 藻种。遇高温、强日照，应及时在培养室顶加盖布帘或聚乙稀彩布条遮光降温。 定期进行显微镜检查，从藻细胞的形态、悬浮、污染等了解其生长情况。 7.2 调节光照、温度和 pH 值 在保种室和二、三级培养场所，应根据藻类生长繁殖要求的适宜光照范围进行调节。利用控温设施， 将室温调控至其生长的适宜温度范围。当pH值超出适宜范围，可用1mol/L HCl溶液或NaOH溶液来调节培 养液的pH值。 7.3 预防污染措施 定期进行室内消毒，禁止非生产人员进入培养室。三级培养池充气要适度，防止水花飞溅造成池 间污染。 7.4 记录 4 DB3302/T 162—2018 对每次检查、接种和培养液添加以及日常操作和观察结果进行记录。 8 收获与保存 8.1 收获 微藻经各阶段培养，达到苗种及养殖生产所要求的藻种浓度和质量即可收获投喂。 8.2 保存 培养出的海洋微藻液暂时不用时，可利用离心、浓缩设备制成藻膏，放入温度≤-18℃的冷冻间冷 冻保存，以备使用。 9 标准化模式图 海洋微藻饵料三级培养的标准化模式图见附录B。 5 DB3302/T 162—2018 AA 附 录 A （规范性附录） 常用海洋微藻饵料培养液配方和最适培养条件 表A.1 常用海洋微藻饵料培养液配方和最适培养条件 培养液配方 培养液名称 成 等鞭金藻培养液 牟氏角毛藻培养液 亚心形扁藻培养液 三角褐指藻培养液 份 用 量 硝酸钠（NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 5 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7） 0.5 g 维生素B1 100 mg 维生素B12 1 mg 消毒海水 1000 L 硝酸钠（NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 4 g 硅酸钠（Na2SiO3） 5 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7） 0.5 g 消毒海水 1000 L 硝酸钠（NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 4 g 尿素（NH2CONH2） 18 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7） 0.5 g 消毒海水 1000 L 硝酸钠（NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 4 g 硅酸钠（Na2SiO3） 4.5 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7） 0.5 g 消毒海水 1000 L 表A.2 常用海洋微藻饵料最适培养条件 种类 温度（℃） 盐度 pH值 光照（lx） 等鞭金藻 20～25 15～30 7.5～8.5 6 000～9 000 牟氏角毛藻 25～30 15～25 8.0～8.9 10 000～15 000 亚心形扁藻 20～28 30～40 7.5～8.5 5 000～10 000 三角褐指藻 10～20 25～32 7.5～8.5 3 000～5 000 6 DB3