ICS 67.120.01 B 40 江 DB36 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1367—2020 猪冷冻精液生产技术操作规程 Code of practice for the production technique of frozen pig semen 2020 - 12 - 29 发布 江西省市场监督管理局 2021 - 07 - 01 实施 发 布 1 DB36/T 1367—2020 目 次 前言 ..................................................................................Ⅱ 1 范围 ................................................................................1 2 规范性引用文件 ......................................................................1 3 术语和定义 ..........................................................................1 4 采精前准备 ..........................................................................2 5 采精 ................................................................................2 6 鲜精品质检测 ........................................................................2 7 鲜精处理 ............................................................................3 8 冷冻 ................................................................................3 9 解冻 ................................................................................4 10 冻精品质检测 .......................................................................4 11 生产记录 ...........................................................................4 附录 A （规范性） 营养液、冷冻稀释液、解冻液配制 .....................................5 I DB36/T 1367—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省畜牧技术推广站、江西省饲料工业办公室、江西省玉山黑猪原种场、吉安 县农业农村局、全南县农业农村局。 本文件主要起草人：余华阳、姜树林、宁财、易松强、徐轩郴、林春斌、陈国良、林克团、杨文清、 丁君辉、钟志勇、陈海洪、卢红梅、万华敏、李伟、陈玲。 II DB36/T 1367—2020 猪冷冻精液生产技术操作规程 1 范围 本文件规定了猪冷冻精液生产技术操作的采精准备、采精、鲜精品质检测、鲜精处理、冷冻、解冻、 冻精品质检测及生产记录等技术要求。 本文件适用于猪冷冻精液生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文 件。 GB/T 23238 种猪常温精液 GB/T 25172 猪常温精液生产与保存技术规范 NY/T 65 猪饲养标准 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 假台猪 dummy sow 采精时用于诱导公猪爬跨行为的仿生母猪制品。 3.2 手握法采精 hand grip semen collection 用手握住公猪阴茎龟头，有节奏地给予压力进行刺激，促使公猪正常射精、并收集其精液的方法。 3.3 鲜精 fresh semen 采集后未经稀释处理的新鲜精液。 3.4 冻精 frozen semen 经过深度冷冻并长期保存在超低温（-196℃）环境下仍具有受精能力的猪精液。 3.5 精子活力 sperm motility 1 DB36/T 1367—2020 在37℃环境下精液中呈直线前进运动精子数占总精子数的百分率。 3.6 精子密度 sperm concentration 8 单位体积精液中的精子数，单位为10 个/mL。 3.7 精子畸形率 abnormal sperm percentage 畸形精子数占总精子数的百分率。 4 采精前准备 4.1 种公猪 4.1.1 种公猪体型外貌和生产性能符合本品种标准，体质健康，系谱齐全。 4.1.2 采精前先修剪种公猪阴毛至 2cm 以下，刷拭公猪体表并清洗消毒。 4.2 采精室 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 检查假台猪是否平稳，擦拭假台猪后半部。 检查假台猪后方的防滑垫，防止公猪爬跨时打滑。 对采精室清洗，并用紫外线消毒。 采精室的温度应控制在 15℃～25℃。 5 采精 采精操作按照GB/T 25172的规定进行。 6 鲜精品质检测 6.1 检测方法 检测方法按GB/T 25172的规定进行，并做好登记。 6.2 质量要求 6.2.1 外观 淡乳白色或灰白色，均匀一致，无杂质。 6.2.2 气味 略带腥味，无异味。 6.2.3 精子活力 精子活力≥70%。 2 DB36/T 1367—2020 6.2.4 精子密度 8 精子密度≥1×10 个/mL。 6.2.5 精子畸形率 精子畸形率≤15%。 7 鲜精处理 7.1 预稀释 营养液(配制见附录A)先预热到32℃，与鲜精1：1混合均匀。预稀释后的精液放入17℃恒温箱内。 7.2 离心 将预稀释精液装入100mL的离心管内，在17℃和重力900g条件下离心15min后，弃上清液。 7.3 稀释 8 冷冻稀释液(配制见附录A)预热至17℃，以精子密度不低于4×10 个/mL计算冷冻稀释液添加量。先 取2/3冷冻稀释液加到离心管中，以吸吐方式混合均匀，装入专用器皿中，再用剩余冷冻稀释液冲洗离 心管壁后合并。 7.4 平衡 将盛放精液的器皿放入17℃水浴杯中，一同放进4℃冰箱，平衡4h。 7.5 分装 7.5.1 将精液分装到 0.25mL 或 0.5mL 细管中，标明生产场、品种、种公猪号和生产日期。 7.5.2 剔除有气泡、未灌满等不合格的细管精液。 7.5.3 将分装好的细管精液铺放在冷冻支架上。 8 冷冻 8.1 冷冻方式 8.1.1 程序冷冻：在程控冷冻仪的冷冻柜里，设置每分钟下降 30℃的速度填充液氮至-196℃。 8.1.2 熏蒸冷冻：将液氮倒入深度 50cm 以上的专用冷冻箱预冷 10min，保持冷冻支架高于液氮面 2cm、 熏蒸冷冻 8min。 8.2 包装 将冷冻好的细管精液包装好，外包装上标明生产场、品种、种公猪号、生产日期和支数等。 8.3 保存 将包装好的细管精液放置液氮中保存。 3 DB36/T 1367—2020 9 解冻 解冻液（配制见附录A)预热至26℃。从液氮罐中快速取出2支～3支细管精液，放至38℃水浴锅中15s 或50℃水浴锅中7s解冻。剪开细管精液封口端，挤入数滴精液至1mL解冻液中，搅匀，回温到37℃，静 置20min。 10 冻精品质检测 10.1 检测方法 检测方法按GB/T 25172的规定进行，并做好登记。 10.2 质量要求 10.2.1 精子活力 精子活力≥30%。 10.2.2 精子密度 8 精子密度≥4×10 个/mL。 10.2.3 精子畸形率 精子畸形率≤18%。 10.2.4 细菌菌落数 细菌菌落数≤800CFU/mL。 11 生产记录 做好冷冻精液生产全流程记录并存档。 4 DB36/T 1367—2020 AA 附 录 A （规范性） 营养液、冷冻稀释液、解冻液配制 A.1 营养液 葡萄糖1.5g、乳糖3g、甘氨酸0.8g，蒸馏水100mL。 A.2 冷冻稀释液 葡萄糖6.12g、EDTA 0.3g、蒸馏水75mL、蛋黄20mL、甘油5mL、乙二醇0.83mL、青霉素和链霉素各 1×10 U、咖啡因0.2mg/mL。 5 A.3 解冻液 葡萄糖3.7g、无水柠檬酸钠0.6g、碳酸氢钠0.125g、EDTA 0.125g、氯化钾0.075g，蒸馏水100mL。 _________________________________ 5