ICS 65.020.20 B 16 黑 龙 DB23 江 省 地 方 标 准 DB 23/T 2803—2021 玉米茎基腐病抗性鉴定及评价技术规程 2021- 01 - 25 发布 黑龙江省市场监督管理局 2021 - 02 - 24 实施 发 布 DB23/T 2803—2021 前  言 本标准依据GB/T 1.1-2009的编写规则起草。 本标准由黑龙江省农业农村厅提出。 本标准由黑龙江省农业科学院玉米研究所、东北农业大学、中国农业科学院作物科学研究所起草。 本标准主要起草人：杨剑飞、李永刚、扈光辉、王天宇、李春辉、龚士琛、李国良、付立新、王明 泉、任洪雷、胡少新、刘畅。 I DB23/T 2803—2021 玉米茎基腐病抗性鉴定及评价技术规程 1 范围 本标准规定了进行玉米茎基腐病抗性鉴定及评价技术的接种体制备、抗病性鉴定圃、接种、病情调 查、抗病性评价和田间档案。 本标准适用于栽培玉米（Zea Mays L.）自交系和杂交种对玉米茎基腐病的田间抗性鉴定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB 4401.1-2008 粮食作物种子 第1部分：禾谷类 NY/T 1248.7-2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第7部分：镰孢茎腐病 DB 23/T 017-2008 玉米生产技术规程 3 接种体制备 3.1 培养基制备 取 200g 去皮马铃薯块，切成小块，加入 800ml～1000mL 的水煮沸 30min，用双层纱布过滤后，用 蒸馏水补足 1000mL，加入 20g 葡萄糖，少量多次加入共 18g 琼脂粉，并不断搅拌，分装至锥形瓶内， 然后将其放置于温热灭菌器中 121℃灭菌 20min，将培养基倒入培养皿中，制成 PDA 平板培养基，备用。 3.2 病原菌准备 取病健交接部分的组织，置于 75%的酒精中浸泡 2s～3s，取出后置于质量体积比为 1%的次氯酸钠 中浸泡 2min～3min，再经无菌水换洗，晒干后转移至 PDA 平板培养基中，置于 25℃～27℃环境中，黑 暗培养 3d 后挑取病原菌至试管中保存。依据柯赫氏法则进行致病力测定，确定为玉米茎基腐病病原菌 的菌株后采用形态学及分子生物学方法进行属种鉴定，从比例占绝对优势的病原菌中选取致病力较强的 菌株作为接种的目标菌株。 3.3 孢子悬浮液制备 从试管中挑取目标菌株，接种到 PDA 平板培养基上，目标病原菌在 PDA 平板培养基上生长 7d 后， 取直径 7mm 的菌碟接种到高粱粒培养基（高粱粒用开水煮 20min 后，转移至三角瓶中 121℃灭菌 45min） 中，每个三角瓶中接种 5 个～7 个菌碟，26℃黑暗培养，每天振荡三角瓶 1 次～2 次，震荡时间 3min～ 5min，待菌丝长满每个高粱粒的表面，然后用无菌水冲洗带菌的高粱粒，用灭菌双层纱布过滤后，利用 血球计数板将孢子悬浮液浓度调整 1×106 孢子/ml，室温保存，2d～3d 内使用。 4 抗病性鉴定圃 1 DB23/T 2803—2021 4.1 鉴定圃设计 鉴定材料采取随机排列，每隔50行鉴定材料设置1组已知抗病、感病对照材料，对照选用玉米自交 系齐319（高抗） 、掖478（高感）。鉴定圃设计符合NY/T 1248.7-2016标准。 2 鉴定材料采用双行区种植，小区行长5m，行距0.65m，植株密度为75000株/hm 。 4.2 鉴定圃播种 鉴定材料播种时间与大田播种时间相当，也可根据当年农业生产气候条件适当调整播种期。播种时 期符合 DB 23/T 017-2008 标准。 鉴定材料种子不进行包衣处理，播种方式采用机器开沟，人工点播，每穴点播种子2粒，出苗后每 穴保留1株健康的植株。种子符合GB 4401.1-2008标准。 4.3 田间管理 田间管理及虫草害防治与大田生产相同，田间管理过程中不使用对茎基腐病有防治作用的药剂，生 产过程符合DB 23/T 017-2008标准。 5 接种 5.1 接种时期 接种时期为玉米苗期，植株长至5片～7片叶时。接种可全天进行。 5.2 接种部位及方法 在植株靠近地表1.5cm～2.0cm处，用注射器以45°角斜向下插入茎中心后缩回0.2cm～0.5cm，注入 1.5ml孢子悬浮液。接种后进行常规田间管理。 6 病情调查 6.1 调查时间 在鉴定材料接种25d后，即可进行调查。同一天接种的材料，应在同一天内完成调查。 6.2 调查方法 调查时根据玉米植株生长情况进行病情分级，病情分级应按表1执行。记录每份鉴定材料的总株数 和各发病级别株数。 表1 玉米茎基腐病鉴定田间病情指数分级 病情分级 植株生长情况 0级 植株生长正常，无症状 1级 叶片边缘有轻微坏死 3级 植株略微矮小，畸形，外缘叶片有轻微的坏死 5级 植株矮小明显，有轻微畸形外缘叶片基本上缺失 7级 植株矮小明显，畸形明显，植株无法正常生长，心叶出现坏死 2 DB23/T 2803—2021 9级 7 植株矮小显著，畸形严重，心叶坏死或全株死亡 抗病性评价 7.1 抗病性评价方法 根据不同材料的病情级别，计算每份鉴定材料的病情指数，病情指数计算公式见式1。 DI   ( N A  X A ) ( N  9)  100 ……………………………………（式1） 式中：DI代表病情指数；NA代表各病级发病株数，单位为株；XA代表相对病级数值；N代表调查总株 数，单位为株。 鉴定材料的抗性评价方法按表2执行。 表2 玉米对茎基腐病抗性的评价标准 病情指数（DI） DI≤10.0 10.0＜DI≤20.0 20.0＜DI≤40.0 DI＞40.0 7.2 抗 性 高抗 Highly resistant （HR） 抗 感 Resistant （R） Susceptible （S） 高感 Highly susceptible （HS） 有效性判别 当设置的高感对照材料达到高感程度，该批次鉴定视为有效。 7.3 重复鉴定 当鉴定材料初次鉴定结果抗性表现为高抗或抗，应在第二年进行重复性鉴定。 7.4 抗病性评价 将初次鉴定结果同重复鉴定结果进行比较，以记载的最高病情指数为准，依此结果对鉴定材料的抗 病性进行评价。 8 田间档案 应建立田间档案，内容包括：鉴定材料名称、接种时间、调查时间、接种总株数、各病情级别发病 株数、病情指数和抗病性评价。 3