ICS 65.020.30 CCS B 43 备案号： 青 DB 63 海 省 地 方 标 准 DB 63/T 1875—2020 青海藏羊冷冻精液腹腔镜输精操作规程 2020 - 12 - 09 发布 青海省市场监督管理局 2021 - 01 - 01 实施 发 布 DB63/T 1875—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由青海省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：青海省家畜改良中心。 本文件主要起草人：莫延新、谢秀梅、冯宇诚、谭建宁、张晋青、张子安、补海平、扈添琴、李梦 怡。 本文件由青海省农业农村厅监督实施。 I DB63/T 1875—2020 青海藏羊冷冻精液腹腔镜输精操作规程 1 范围 本文件规定了青海藏羊冷冻精液腹腔镜输精过程中的组群、同期发情处理、发情鉴定、输精前的准 备、输精、输精后的护理、妊娠诊断。 本文件适用于种畜场、保种场、规模化养殖场、合作社等。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 DB63/T 039 青海藏羊 DB63/T 547.1 青海藏羊饲养管理技术规范 DB63/T 1436 藏羊细管冷冻精液生产技术规程 3 术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 腹腔镜人工输精 通过采用套管穿刺的方法，借助腹腔镜将精液输送到母畜子宫角的人工输精技术。 4 4.1 组群 母羊群的准备 按照 DB63/T 039 要求，选择体质健康、发情正常、无流产史的成年母羊单独组群，按照 DB63/T 547.1 进行母羊配种前、后饲养管理。 4.2 试情公羊的准备 挑选体质健康无病、性欲旺盛的 2 岁～5 岁公羊作为试情公羊。 5 同期发情处理 应用阴道栓（CIDR)+孕马血清促性腺激素（PMSG）+氯前列醇注射液进行发情处理，具体操作如下： 1 DB63/T 1875—2020 a) b) 6 放置阴道栓，记为同期发情处理的第 0d。 第 12d，撤栓，并注射 400 国际单位孕马血清（PMSG),0.2mg 氯前列醇注射液（PG）。 发情鉴定 同期发情处理第13 d,早晚用腹下系有试情布的试情公羊进行试情，试情公羊与母羊的比例宜为1： 20～1：40，主动接近公羊并接受公羊爬跨的母羊即判定为发情，及时隔离，待输精。 7 7.1 输精前准备 器械设备准备 准备液氮罐、保定架、恒温水浴锅、超声波洗涤仪、1000 mL 容量瓶、高压灭菌锅、电热鼓风干燥 箱、羊腹腔内窥镜、输精枪、显微镜等设备。按照 NY/T 1234 进行器械的清洗和消毒。 7.2 药品准备 盐酸赛拉嗪注射液、盐酸苯噁唑注射液、0.1 %新洁尔灭溶液、0.9 %的NaCl溶液、2 %碘酊、75 % 乙醇、青霉素。 7.3 输精母羊准备 发情母羊停食停水12h。 7.4 人员准备 用0.1 %新洁尔灭溶液清洗手臂擦干，进入输精操作室，穿戴好工作服、帽、口罩，用75 %酒精棉 球擦拭消毒手臂，戴医用手套。 8 8.1 输精 输精时间 发情后12h～24h内进行输精。 8.2 输精间要求 输精间要求干净明亮，光线充足、无尘。室内温度保持在20 ℃～25 ℃。早、晚喷雾消毒，输精 前用紫外灯照射1h～2h。 8.3 细管冻精准备 按照DB63/T 1436进行细管冻精解冻、镜检，精子活力符合DB63/T 1436的要求。 8.4 输精母羊的保定 º º 仰卧斜倒立保定在手术架上，角度为40 ～60 。输精前5 min肌肉注射2 % 0.5mL盐酸赛拉嗪作全麻 处理。 8.5 手术部位及消毒 2 DB63/T 1875—2020 手术部位在母羊乳房下方8 cm～10 cm，离腹中线4 cm处。经剪毛和清水清洗后，用2 %碘酊消毒， 待干后再用75 %酒精脱碘，盖上手术巾。 8.6 输精操作 8.6.1 装枪 解冻镜检后活力符合要求的细管冻精，将有棉塞的一端套到输精枪钢芯上，将钢芯拉到底套上输精 枪外套管，细管剪口端与套管针头端顶紧，外套管后段与输精枪后螺纹旋转卡紧，用于输精操作。 8.6.2 穿刺 操作人员轻轻抓起母羊皮肤将穿刺部位皮肤和肌肉组织错开，食指与拇指同时握住穿刺针的前端， ° 以握拳状将针以向内45 进行穿刺，当前端已经刺入皮肤后，将穿刺针撤出，使用套管向腹腔内进行钝 性穿刺。按此方法，将1.0cm和0.5cm直径穿刺针分别刺入腹中线两侧。 8.6.3 卵巢发育状态观察 在0.5 cm直径套管中插入长钳，1 cm直径套管中插入冷光源。通过长钳找到并夹住一侧的输卵管， 轻轻向另一侧带动，使卵巢暴露在冷光源范围内，观察卵泡发育情况，卵巢上有卵泡或者卵泡刚刚排出， 排出部位呈现火山口状或新鲜的出血点时，进行输精。 8.6.4 输精 通过长钳将子宫角调整到中线正对视野范围内，撤出长钳，将已放置了冻精的输精枪插入到撤出的 套管中，借助冷光源对准子宫角上1/3（大弯）处，手腕用力，快速将针头垂直刺入到子宫角内，推动 输精枪钢芯注入细管冻精1支（0.25ml剂型）后退出针头。同样的方法完成另一侧子宫角输精。 9 输精后的护理 完成输精后，肌注0.5mL盐酸苯噁唑。用碘酊对穿刺部位进行消毒处理，同时肌注160万单位青霉素， 无须缝合，直接将母羊放入单独圈舍统一管理，防止剧烈运动，第一次采食要控制饲喂量，为正常量的 1/3，以防腹腔内大网膜从创口处鼓出。 10 妊娠诊断 输精后40d后,母羊站立保定，通过兽医B超仪（探头为s3/3.5 MHZ机械扇扫）在乳房与后腿上部交 叉的无毛区域进行探测，检测时将探头与皮肤垂直，压紧，匀速贴皮肤移动。B超仪屏幕上显示出孕囊 即判断羊怀孕；未检测出孕囊即判断羊未孕。 _________________________________ 3