ICS65.020.30 CCSB43 DB50 重庆市地方标准 DB50/T1461—2023 地方猪遗传材料冷冻保存技术规范 2023-09-15发布 2023-12-15实施 重庆市市场监督管理局 发布 DB50/T1461—2023 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由重庆市农业农村委员会提出、归口并组织实施。 本文件起草单位：重庆市畜牧科学院、重庆市畜牧技术推广总站、上海市农业科学院、四川省内江 市农业科学院。 本文件主要起草人：潘红梅、朱燕、戴建军、吴彩凤、何孟纤、张亮、龙熙、陈力、郭宗义、高小 平、周旗、任素碧、涂志、柴捷、查琳。 DB50/T1461—2023 1地方猪遗传材料冷冻保存技术规范 1范围 本文件规定了地方猪种遗传材料冷冻保存的基本要求、冷冻精液、冷冻成纤维细胞、冷冻胚胎、入 库保存及档案管理的要求。 本文件适用于地方猪精液、成纤维细胞和胚胎的冷冻保存。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T24862畜禽体细胞库检测技术规程 GB/T25172猪常温精液生产与保存技术规范 NY/T1674牛羊胚胎质量检测技术规程 NY/T1900畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 遗传材料geneticmaterial 含有畜禽基因组、基因等遗传物质的器官、组织、细胞、精子、卵母细胞和胚胎等的生物样本。 4基本要求 4.1供体应健康，符合品种特征特性。 4.2可利用后备或淘汰母猪进行胚胎回收。 5冷冻精液 5.1供体数量 5.1.1系谱清晰的保种群，每个家系宜保存3头及以上公猪，不足3头全部保存。保存的公猪精液 应覆盖所有家系。 5.1.2系谱不清的保种群，宜保存10头以上公猪，不足10头全部保存。 5.2质量要求 5.2.1有效精子数每支不低于5000万个。 DB50/T1461—2023 25.2.2冻精解冻后活力不低于30%。 5.2.3精子畸形率不高于40%。 5.2.4细菌菌落数不高于1000CFU/mL。 5.2.5每个个体保存0.5mL细管冻精不低于300支。 5.3标识与记录 5.3.1在细管上标明供体单位、品种、编号、家系和生产日期。 5.3.2记录公猪精液冷冻信息，公猪精液冷冻记录表见附录A.1。 5.4品质检测 应按照GB/T25172的规定执行。 6冷冻成纤维细胞 6.1供体数量 6.1.1系谱清晰的保种群，保存的成纤维细胞应覆盖所有家系。每个家系公猪成纤维细胞宜保存3头 及以上，不足3头全部保存。每个家系母猪成纤维细胞宜保存6头及以上，不足6头全部保存。 6.1.2系谱不清的保种群，宜保存10头以上公猪和30头以上母猪的成纤维细胞，公猪不足10头、 母猪不足30头全部保存。 6.2质量要求 6.2.1制作和质量应符合NY/T1900要求。 6.2.2每个个体细胞体外培养至3～4代，冷冻6管细胞，细胞密度为1×105个/mL～5×105个/mL。 6.2.3冻后台盼蓝染色检查细胞活力80%以上，生长曲线与冷冻前生长曲线相近，核型正常，无病 原菌和支原体污染。 6.3标识与记录 6.3.1在冻存管上标明供体单位、品种、样品编号、家系、性别、培养代数和冷冻日期等。 6.3.2记录成纤维细胞冷冻信息，成纤维细胞冷冻记录表见附录A.2。 6.4品质检测 应按照GB/T24862的规定执行。 7冷冻胚胎 7.1供体数量 7.1.1系谱清晰的保种群，用于胚胎收集的母猪和相应的配种公猪应覆盖所有家系，每个家系的配种 公猪不少于3头，不足3头全部参加配种；母猪不少于6头，不足6头不宜制作冷冻胚胎。 7.1.2系谱不清的保种群，宜保存25头母猪的胚胎，其中配种公猪数宜不少于10头。群体母猪数 低于50头，宜保存淘汰母猪胚胎。 7.2质量要求 DB50/T1461—2023 37.2.1回收的胚胎为首次配种后第6d和第7d的桑椹胚和囊胚。 7.2.2胚胎冷冻前的质量要求为A级，检测方法参照NY/T1674的规定执行。 7.3标识与记录 7.3.1在胚胎冻存细管上标明供体单位、品种、供体母猪号、与配公猪号、胚胎发育期、胚胎等级、 冷冻方法、数量和冷冻日期等。 7.3.2记录胚胎冷冻信息，胚胎冷冻记录表见附录A.3。 8入库保存 冷冻精液、成纤维细胞和胚胎应符合本文件规定的质量要求，浸没于液氮中保存。 9档案管理 档案记录应长期保存。 DB50/T1461—2023 4附录A （规范性） 遗传材料冷冻保存的技术资料 A.1公猪精液冷冻记录表。 表A.1公猪精液冷冻记录表 品种： 制作地点： 制作日期： 公猪 原精 原精稀释 离心后稀释平衡 冻精制 作 人备 注 耳 号品 种采精 量 /mL活力 （%）密度 亿/mL稀释 倍数活 力%密度 亿/mL预设 密度 亿/mL稀释 量 mL平 衡 时 间 h平 衡 后 活 力 %解 冻 后 活 力 %支 数袋 数 记录人：