ICS65.020.01 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2947—2016 枸杞中甜菜碱含量的测定 高效液相色谱法 Determination of betain in wolfberry-HPLC method 行业标准信息服务平台 2016-10-26发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2947—2016 前 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业部枸杞产品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：王晓菁、牛艳、吴燕、姜瑞、张锋锋 行业标准信息服务平台 I NY/T2947—2016 枸杞中甜菜碱含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了枸杞中甜菜碱的测定方法。 本标准适用于枸杞中甜菜碱含量的测定。 本方法检出限为0.001g/100g。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 枸杞样品中甜菜碱组分经甲醇溶液(CHOH-H2O)=2.5十7.5]提取后.用混合型阳离子交换 固相萃取柱净化，再用乙睛溶液L(CH:CN-H2O)=7.5+2.5]定容，最后用配有紫外检测器的高效液 相色谱仪在波长205nm处测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量 4试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的一级水。 4.1氨水：含量为25%~28%，优级纯。 4.2盐酸：含量为36%~38%，优级纯。 4.3甲醇(CH:OH)：色谱纯。 4.4乙腈（CH，CN)：色谱纯。 4.5盐酸溶液c(HCI)=0.1mol/L：准确吸取9mL盐酸，加适量水并稀释定容至1000mL。 4.6甲醇溶液Ly（CHOHH2O）=2.5+7.5]：取25mL甲醇慢慢加人75mL水中。 4.7甲醇溶液[y(CHOH-H2O)=8.5+1.5]：取85mL甲醇慢慢加人15mL水中。 4.8氨化甲醇溶液Ly（NH，·HzO-CHOH)=0.5+9.5]：取5mL浓氨水慢慢加入95mL水中。 4.9乙睛溶液Ly(CHCN-HO)=7.5+2.5]取75ml乙睛慢慢加人25mL水中。 4.10甜菜碱标准品：≥纯度98%。 4.11甜菜碱标准储备液溶液：准确称取甜菜碱标准物质100mg（精确到0.0001g）用乙睛溶液（4.9） 溶解并定容至10.0mL.配制成10.0mg/mL标准储备液，0℃~4℃购存。 4.12阳离子交换固相萃取小柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为聚苯乙烯 希一二乙烯基苯高聚 物，150mg/6mL，或相当者。 5仪器与设备 5.1液相色谱仪：配有紫外检测器。 5.2分析天平：感量士0.0001g。 5.3离心机：4000r/min。 1 NY/T2947—2016 5.4 涡旋混合器。 5.5 ：组织捣碎机：12000r/min。 5.6 均质器：24000r/min。 5.7高速万能粉碎机：10000r/min。 5.8 旋转蒸发仪 5.9 微孔滤膜：0.45μum，有机相。 6 试样制备 立即用高速方能粉碎机（可加少量液氮）粉碎 ，置于样品瓶中·P89B东备用 （30g样品粉碎时间约为20 Qs）置于样品瓶中，一18℃冷 冻备用。 7分析步骤 7. 1 # 提取 样1g（精确到0.00） 离心管中 称取枸杞干 nL甲醇溶液 （4.6），涡旋混勺 提取2min，以3500斤 min离L5mn.取出备 7.2净化 吸取上清液5 传人已活化 一衡的混合型阳高 换固相幸取柱中 商S 的流速，待 样液进入萃取小柱 7）.5mL甲醇进行淋洗 县后依次 将洗脱液旋转浓缩近 乙睛溶液 5mL氨化甲醇（4. m （4.9)溶解定容 酸浴液 夜活化平衡。 交换固 混合型阳离 ml mol 7.3色谱参考条件 色谱柱：亲水 4.6mmc 流动相：乙睛 流速：1.0mL/ 柱温：30℃； 波长：205nm； 进样量：10.0L； 流动相梯度洗脱程序见表 时间，min 乙腈，% 水% 0 -90 2 10 30 70 3 50 50 4 50 50 9 10 5 95 15 5 95 7.4标准曲线的绘制 用乙溶液（4.9）将甜菜碱标准贮备液溶液逐级稀释得到浓度为0g/100mL、0.002g/100mL 2 NY/T2947—2016 0.005g/100mL.0.01g/100mL.0.02g/100mL.0.05g/100mL.0.1g/100mL.0.2g/100mL的标准 工作液，依次由低到高进样检测，质量浓度X（g/100mL）为横坐标，以相应的峰面积Y为纵坐标进行线 性回归，得到标准曲线回归方程。 7.5测定 取标准工作溶液和样品定容液（7.2）进样测定，以色谱峰保留时间定性，以标样色谱峰峰面积和样 品溶液峰峰面积比较定量。同时做空白实验。 8 结果计算 试样中甜菜碱含量按式（1）计算 (1) 式中： X 试样 为克每 百克（g c 百毫升（g/100mL）； V 试样中 中加人的提 取溶液 积，单位为毫升（mL Vi 式样 的最级定 容体积，单 为毫 m 试桂 羊的质量 单位为克 提取液分取 V2 体积.单位为毫升（mL 计算结果 有效数宇 R 9 色谱图 甜菜碱 枸杞样品中甜莱碱组分谱图见图A.1、图A.2 10精密度 C 在重复性 测试结果的绝对 测烟 条件 得的2次独立 勺算 术平均值的10%， 以大于这2 5%在再现性条 0%情况不超过 2次独立测试结果 个 值 的 均值的10%以大于这2个测 的绝对差值 术平 定值的 术平均值的10%情况 正值 ER 不超过5%。 尔 服务平台 3 NY/T 2947—2016 附录A 资料性附录） 甜菜碱标准溶液色谱图和样品色谱图 A. 1 甜菜碱标准溶液色谱图 见图A.1。 0.050 0.040 甜菜碱-7.965 0.030 20.020 0.010F 0.000 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 min 图A.1 甜菜碱标准溶液色谱图（0.02g/100g) A.2枸杞样品中甜菜碱组分色谱图 见图A.2。 0.12 0.10E 0.08 =0.06 0.04 0.02 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.0016.0018.00 20.00 22.00 24.00 min 务平台 图A.2 枸杞样品中甜菜碱组分色谱图 4 NY/T 2947—2016 附录A 资料性附录） 甜菜碱标准溶液色谱图和样品色谱图 A. 1 甜菜碱标准溶液色谱图 见图A.1。 0.050 0.040 甜菜碱-7.965 0.030 20.020 0.010F 0.000 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 min 图A.1 甜菜碱标准溶液色谱图（0.02g/100g) A.2枸杞样品中甜菜碱组分色谱图 见图A.2。 0.12 0.10E 0.08 =0.06 0.04 0.02 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.0016.0018.00 20.00 22.00 24.00 min 务平台 图A.2 枸杞样品中甜菜碱组分色谱图 4