SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0602—2016 代替SN0602—1996 出口植物源食品中草唑残留量测定方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of pyrazoxyfen residue in plant-originated foodstuffs for export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2017-03-01实施 2016-08-23发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T0602—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替SN0602—1996《出口粮谷中匹唑芬残留量检验方法》。本标准与SN0602—1996相 比，除编辑性修改外主要技术变化如下： 标准适用范围由糙米扩展到大米、糙米、玉米、红小豆、卷心菜、胡萝卜、香蕉； 一将匹唑芬改为通用名苄草唑； 前处理改为酸性乙腈提取，N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基硅烷（Cis）净化； 一测定仪器由液相色谱改为液相色谱-质谱/质谱； 略去了抽样步骤。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局 本标准主要起草人：李淑静、陈其勇、崔颖、何佳、王飞、娄婷婷等。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -SN0602—1996。 行业标准信息服务平台 1 SN/T0602—2016 出口植物源食品中芒草唑残留量测定方法 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口食品中芋草唑残留量的超高效液相色谱-质谱/质谱测定方法 本标准适用于出口大米、糙米、玉米、红小豆、卷心菜、胡萝卜、香蕉中芊草唑残留量的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中残留的苄草唑经含1%冰乙酸的乙腈溶液提取，提取液经N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基 硅烷（C1s）净化，采用超高效液相色谱-质谱/质谱检测，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2 冰乙酸：色谱纯。 甲酸：色谱纯。 甲醇：色谱纯。 4.4 4.5 无水硫酸镁：分析纯，经650℃灼烧4h，保存在干燥器中。 4.6 氯化钠：分析纯。 4.7 0.1%甲酸溶液：量取1mL甲酸溶解于水中，并定容至1L。 4.8 提取溶剂（含1%冰乙酸的乙腈溶液）：加1mL冰乙酸（4.2）到99mL乙腈（4.1)中。 4.9 芊草唑（pyrazoxyfen）标准品：CAS号71561-11-0，纯度大于98%。 ）标准储备溶液：准确称取适量苄草唑标准品（4.9），精确至0.1mg，经乙睛溶解、稀释并定容至 4.10 10mL，配制成浓度为1mg/mL的标准储备溶液。此溶液在0℃～4℃条件下避光可储存6个月。 4.11标准中间溶液：根据需要逐级稀释混合标准储备溶液（4.10），配制成适当浓度的标准中间溶液， 此溶液在0℃～4℃条件下避光可储存1个月。 4.12空白样品基质溶液：称取均质空白样品，按7.1和7.2步骤进行操作 4.13标准工作溶液：移取适量标准中间溶液（4.11），用空白样品基质溶液（4.12)稀释，使所得该溶液为 标准工作溶液，现用现配。 4.14N-丙基乙二胺(PSA)吸附剂：40μm~100μm。 4.15十八烷基硅烷（Cls）吸附剂：40μm~100μm。 1 SN/T 0602—2016 4.16 微孔滤膜：0.22um，有机系。 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱联用仪：配电喷雾离子源（ESI源）。 5.2振荡器。 5.3电子天平（感量为0.1mg和0.01g）。 5.4涡旋混合器。 5.5组织捣碎机。 5.6米 粉碎机：转速不低于5000r/min。 5.7旋转蒸发仪。 5.8 离心机。 5.9± 螺旋盖聚丙烯离心管：50mL，15mL。 5.10 浓缩瓶：150mL。 6试样制备与保存 6.1试样制备 6.1.1大米、糙米、玉米、红小豆 取有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器，密封并标明标记， 6.1.2卷心菜、胡萝卜、香蕉 取有代表性样品约500g（不可用水洗涤），将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状， 装人洁净容器，密封并标明标记。 6.2试样保存 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。大米、玉米、红小豆等试样于 4℃以下保存：卷心菜、胡萝卜、香蕉等试样于一18℃避光保存。 7测定步骤 7.1提取 7.1.1大米、糙米、玉米、红小豆 准确称取5g（精确至0.01g）试样于50mL螺旋盖聚丙烯离心管中，加人8ml水，涡旋混合器上 混合30s，静置10min。加人4g无水硫酸镁（4.5），1g氯化钠（4.6），20mL提取溶剂（4.8），剧烈振荡 2min使之混合均匀，5000r/min离心5min，取上层清液5mL待净化 7.1.2卷心菜、胡萝卜、香蕉 准确称取10g（精确至0.01g）试样于50mL螺旋盖聚丙烯离心管中，加入20mL提取溶剂（4.8)后 均质，加人5g无水硫酸镁（4.5），1g氯化钠（4.6），剧烈振荡2min使之混合均匀，5000r/min离心 5min，取上层清液5mL待净化。 2 SN/T 0602—2016 7.2净化 （4.14)填料和100mgCis（4.15）填料的15mL螺旋盖聚丙烯离心管中：在涡旋混合器上混合1min， 5000r/min离心5min，上清液过0.22μm滤膜（4.16），供液相色谱-质谱/质谱测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱-质谱/质谱条件 液相色谱-质谱/质谱条件如下： a) 色谱柱：ACQUITYUPLCBEHCis柱，2.1mmX100mm，1.7μm，或相当者； b) 流动相：甲醇+1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序见表1； c) 流速：0.3mL/mim; d) 进样量：5μL； e) 柱温：25℃； f) 电离方式：ESI十； g) 扫描方式：多反应监测模式（MRM）； 其他参考质谱条件参见附录A 表1 液相色谱梯度洗脱程序 时间/min 流速/(mL/min) A（甲醇)/% B(0.1%甲酸水)/% 0.00 0.300 20.0 80.0 6.00 0.300 90.0 10.0 6.10 0.300 20.0 80.0 8.00 0.300 20.0 80.0 7.3.2 液相色谱-质谱/质谱检测和确证 7.3.2.1 定性测定 度与浓度相近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定 的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表2使用定性液相色谱-质谱/质谱时相对离子丰度最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 20~50 10~20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.2.2 定量测定 在仪器最佳工作条件下，根据样液中被测物的含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作 溶液和样液中芊草唑的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测 3 SN/T 0602—2016 定。在上述仪器条件下，苄草唑的保留时间为4.19min。芊草唑标准物质的液相色谱-质谱/质谱图参 见附录B中图B.1。 7.4空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。 7.5 结果计算和表述 用色谱数据处理系统或按式（1)计算试样中草唑残留含量，计算结果需扣除空白值。 AXcXV X= ..(1) A.Xm×1 000 式中: X一一试样中芊草唑残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 一样液中草唑的峰面积； 标准工作液中芊草唑的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V——样液最终定容体积，单位为（mL)； A标准工作液中芊草唑的峰面积； 一最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。 m- 8 测定低限与回收率 8.1 测定低限 本方法苄草唑的测定低限均为0.01mg/kg。 8.2 回收率 不同基质中不同浓度添加水平下的回收率范围参见附录C。 行业标准信息服务平台 SN/T 0602—2016 附录A （资料性附录） HPLC-MS/MS参考质谱条件1) 质谱条件： a) 毛细管电压：3kV； b) 离子源温度：400℃； c) 脱溶剂气流速：800L/hr； (p 锥孔反吹流速：50L/hr； 待测农药定性、定量离子对锥孔电压和碰撞电压见表A.1。 ( 表 A.1 待测农药定性、定量离子对、锥孔电压和碰撞电压 中文名称 保留时间/min 母离子（m/） 子离子（m/z） 锥孔电压/V 碰撞电压/V 105 48 22 芊草唑 4.20 403 91* 48 34 行业标准信息服务平台 1) 非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在WatersXevoTQMS型液质联用仪上完成的，此处列出试验用 5