SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4089—2015 出口食品中高氯酸盐的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of perchlorate in foods for export- LC/MS/MS method 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4089—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：吴映璇、欧阳少伦、潘丙珍、邵琳智、林峰、姚仰勋、潘淑贤、卢丽。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4089—2015 出口食品中高氯酸盐的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口食品中高氯酸盐的液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。 本标准适用于瓶装水、水果、牛奶、奶粉、谷物、水产品和动物组织中高氯酸盐（高氯酸根离子）含量 的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 采用1%乙酸溶液提取试样中的高氯酸盐，乙睛沉淀蛋白，固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱 检测和确证，同位素内标法定量。 4试剂和材料 除特殊注明外，所有试剂均为色谱纯，水为符合GB/T6682规定的一级水，所用器具均需用30%硝 酸溶液浸泡8h，去离子水反复冲洗干净，烘干后备用 4.1乙腈。 4.2乙酸。 4.3 乙酸铵，优级纯。 4.4 高氯酸盐标准溶液（sodiumperchlorate).CAS号：7601-89-0，纯度：100%，浓度1000mg/L。 高氯酸盐同位素内标溶液（perchloricacid，sodiumsalt，180,）：纯度：90%，浓度100μg/mL。 4.6 1%乙酸溶液：移取10.0mL乙酸（4.2)至1L容量瓶中，加水至刻度，摇匀备用。 4.7 100mmol/L乙酸铵溶液：称取7.708g乙酸铵（4.3），用水定容至1000mL。 4.8 标准储备溶液：10mg/L。准确吸取适量高氯酸盐标准溶液（4.4），置于100mL容量瓶中，用水定 容至刻度。该溶液于0℃～4℃保存。 4.9标准中间溶液：100μg/L准确吸取1.00mL标准储备溶液（4.8），置于100mL容量瓶中，用水定 容至刻度。该溶液于0℃～4℃保存。 容至刻度。该溶液于0℃~4℃保存。 4.11内标储备溶液：10mg/L。准确吸取适量的内标标准溶液（4.5），置于10mL容量瓶中，用水定容 至刻度。该溶液于0℃～4℃保存。 4.12内标中间溶液：100μg/L。准确吸取1.00mL内标储备溶液（4.11），置于100mL容量瓶中，用水 1 SN/T 4089—2015 定容至刻度。该溶液于0℃～4℃保存。 4.13内标工作溶液：10ug/L。准确吸取1.00mL内标中间溶液（4.12），置于10mL容量瓶中，用水定 容至刻度。该溶液于0℃～4℃保存。 4.14标准工作溶液：吸取一定量的标准使用溶液（4.10）和内标使用溶液（4.13），用水配制成系列浓度 的标准工作溶液，浓度在0～10μg/L范围内，内标浓度均为2.0μg/mL，当天配制。 4.15固相萃取Cs柱：200mg，3mL或相当者。用前依次以3mL乙腈（4.1）、3mL1%乙酸（4.6）活 化，保持柱子湿润。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)。 5.2分析天平：感量为0.01g。 5.3 3高速离心机：最大转速12000r/min。 5.4组织粉碎机。 5.5均质器。 5.6水平振荡器。 5.7 涡旋振荡器。 5.8[ 固相萃取装置。 具塞聚丙烯离心管：50mL。 5.10 移液枪：10μL~100μL,100μL~1000μL。 6 试样制备和保存 6.1 制备与保存 6.1.1瓶装水、牛奶、奶粉 取代表性样品约500g，装人洁净容器内密封，标明标记。于0℃～4℃保存。 6.1.2水果、水产品、动物组织 取代表性样品约500g，将其可食部分先切碎，经组织捣碎机充分捣碎均匀，装人洁净容器内密封， 标明标记。于一18℃以下冷冻保存。 6.1.3谷物 服务平台 取代表性样品约500g，经组织捣碎机粉碎并通过1.0mm孔筛，混均，装入洁净容器内密封，标明 标记。常温下保存。 6.2 试样保存 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 7测定步骤 7.1提取 7.1.1瓶装水 准确吸取试样980μL至试管中，加20μL内标中间溶液（4.12），涡旋振荡30s，过滤膜，供液相色 2 SN/T4089—2015 谱-质谱/质谱仪测定。 7.1.2 水果 乙酸溶液（4.6），涡旋振荡2min，10000r/min离心10min，分离上清液于具塞离心管，用1%乙酸溶液 （4.6）定容至30mL刻度，摇匀，待净化。 7.1.3牛奶、奶粉、谷物 称取试样5g（精确至0.01g）至50mL离心管中，加100μL内标中间溶液（4.12），加10.0mL（牛奶 加5.0mL）1%乙酸溶液（4.6），涡旋振荡2min，加20.0mL乙腈，水平振荡器振荡30min，10000r/min 离心10min，分离上清液于具塞离心管，用1%乙酸溶液（4.6）定容至30mL刻度，摇匀，待净化。 7.1.4水产品、动物组织 称取试样5g（精确至0.01g）至50mL离心管中，加100μL内标中间溶液（4.12），加10.0mL1% 乙酸溶液（4.6），勾质提取30s，另取一离心管，加20mL乙腈洗涤均质器刀头，合并提取液，水平振荡器 振荡30min，10000r/min离心10min，分离上清液于具塞离心管，用1%乙酸溶液（4.6）定容至30mL 刻度，摇匀，待净化。 7.2净化 吸取1.0mL上述上清液（7.1.2~7.1.4)过固相萃取Cis柱（4.15），弃去流出液，吸取1.5mL上清液 过固相萃取Cis柱（4.15），收集流出液，涡旋振荡30s，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3测定 7.3.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： 色谱柱：IC-PakTMAnionHR柱，6μm，4.6mm×75mm(内径)或相当者； a) b) 流动相：乙腈+乙酸铵溶液（4.7）=（60十40）； 流速：700μL/min; d) 柱温：40℃； e) 进样量：10μL。 7.3.2 质谱条件 质谱条件如下： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI） b) 扫描方式：负离子扫描； 监测模式：多反应监测（MRM)； d) 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以及离子源温度 使质谱灵敏度达到检测要求，参见附录A； e) 喷雾电压、去集簇电压、碰撞能量等参数应优化至最优灵敏度，监测离子和定量离子等参见附 录A中表A,1。 3 SN/T 4089—2015 7.3.3液相色谱-质谱/质谱检测 7.3.3.1定量测定 标准工作溶液和待测样液中被测物的响应值均应在仪器线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积 参插进样测定。如果试样中被测物的含量超出工作曲线线性，则按需要稀释后，进行测定。在上述色谱、 质谱条件下高氯酸盐的参考保留时间为4.6min，高氯酸盐标准溶液的多反应监测色谱图参见附录B。 7.3.3.2定性测定 按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中待测物质的保留时间与标准 品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工 测物。 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.3.4空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 8结果计算和表述 用质谱数据处理机或按式（1）计算试样中药物的含量，计算结果需扣除空白值： R, Xc: XV X, = (1) R,Xm 式中： 试样中目标化合物的含量，单位为纳克每克（ng/g）； R 样液中的分析物与内标物峰面积的比值； 从标准曲线上得到的药物含量的溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； ci V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； R. 标准曲线中分析物与内标物峰面积的比值； 息服务平 m 最终样液代表的试样质量，单位为克（g）。 9测定低限、回收率 9.1检测低限 本方法瓶装水中高氯酸盐的测定低限为0.5ug/L,水果、牛奶中高氯酸盐的测定低限均为1.0uμg/kg， 奶粉、谷物、水产品、动物组织中高氯酸盐的测定低限均为3.0μg/kg。 9.2回收率 本方法对瓶装水、水果、牛奶、奶粉、谷物、水产品和动物组织等基质进行添加回收率试验，高氯酸盐 的添加浓度及回收率范围参见附录C表C.1。 4 SN/T4089—2015 附录A （资料性附录） 参考质谱条件1) A.1 扫描方式：负离子扫描。 A.2 监测模式：多反应监测（MRM)。 A.3 气帘气(CUR)：209kPa(30psi)。 A.4 雾化气（GS1)：414kPa(60psi)。 A.5 辅助加热气（GS2）：483kPa（70psi）。 A.6 碰撞气(CAD)：HIGH。 A.7 电喷