SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4137—2015 出口水产品中二苯甲酮类和 对羟基苯甲酸酯类残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of benzophenone and methyl p-hydroxybenzoate in aquatic products for export-LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4137—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局 本标准主要起草人：韩超、周秀锦、胡贝贞、陈祥准、戴骐、朱振瓯。 行业标准信息服务平台 一 SN/T4137—2015 出口水产品中二苯甲酮类和 对羟基苯甲酸酯类残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口水产品中二苯甲酮类和对羟基苯甲酸酯类（2,4-二羟二苯甲酮、2,2°，4.4'-四羟 基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯)残留量的 液相色谱-质谱/质谱检测方法 本标准适用于带鱼、黄鱼、羊栖菜、紫菜、海带、虾中2，4-二羟二苯甲酮、2,2'，4，4-四羟基二苯甲 确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 采用同位素稀释技术，样品经甲醇超声萃取，萃取液经固相萃取柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱 仪测定，内标法定量。 4试剂与材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水， 信息服： 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙睛：色谱纯。 4.3 乙酸：色谱纯。 4.4 氨水：含量为25%。 4.51%乙酸溶液：量取1mL乙酸到100mL容量瓶中，用水定容至刻度。 刻度。 4.72%氨水甲醇：量取2mL氨水到100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 4.820%甲醇溶液：量取20mL甲醇到100mL容量瓶中，用水定容至刻度 4.9标准品：2,4-二羟二苯甲酮（C13H1oO3，CAS：131-56-6），2，2°，4，4-四羟基二苯甲酮（C13HioOs， 99-76-3），尼泊金乙酯（CgHloO3，CAS：120-47-8），尼泊金丙酯（C1oH12O：，CAS：94-13-3），尼泊金丁酯 1 SN/T4137—2015 （CnH4O3，CAS：94-26-8），2，4-二羟二苯甲酮-D5（C13H,D,O3，CAS：91586-06-0），2-羟基-4-甲氧基二 苯甲酮-D5（C14H,D,O3，CAS：1219798-54-5），尼泊金丙酯-D7（C10H,D,O3CAS：1246820-92-7） 4.10标准储备溶液：准确称取适量的各标准物质（4.9），用甲醇（4.1)稀释，分别配制成浓度为200.0μg/mL 的标准储备溶液，此溶液在一18℃以下避光保存。 4.11标准中间溶液：取适量的各种储备溶液，用甲醇（4.1)稀释，配制成2.0ug/mL的标准中间溶液， 此溶液在0℃～4℃避光保存。 内标2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-D5和尼泊金丙酯-D7浓度均为20ng/mL。标准工作溶液现用现配。 4.13强阳离子交换柱固相萃取柱（60mg，3mL），或相当者。使用前以3.0mL甲醇、5.0mL1%乙酸 水溶液活化。 4.14微孔滤膜：0.22um，有机相型。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2超声波清洗器。 5.3固相萃取装置。 5.4氮吹仪。 5.5旋转蒸发仪。 5.6食品粉碎机。 5.7涡旋混合器。 5.8分析天平：感量0.1mg。 6试样制备与保存 品勾浆，将试样装人洁净容器内，密封并标识。将试样存放于4℃冰箱内。 在制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7测定步骤 7.1提取 称取样品约2g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加人0.1mL同位素内标溶液（1000ng/mL） 和20mL甲醇，混后，于超声波清洗器中超声提取30min，提取温度为30℃，于4000r/min离心 5min，过滤并用甲醇定容到25mL容量瓶中，待净化。 7.2净化 从25mL待净化液（7.1）中取10mL提取液，40℃氮气吹近干，先用2mL的1%乙酸水-甲醇 （4.6）溶液溶解残渣，再加人6mL水，混匀后使该样液以小于1mL/min的流速通过强阳离子交换柱固 相萃取柱（4.13）。样液全部流出后，先用6mL1%乙酸溶液（4.5）和6mL20%甲醇溶液（4.8）淋洗，负 的甲醇溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜后，供LC-MS/MS测定。 2 SN/T 4137—2015 7.3测定 7.3.1 液相色谱参考条件 7.3.1.1 色谱柱：C18柱，150mmX2.1mm，粒径3.5μm，或相当者。 7.3.1.2 流动相：0.1%的乙酸：乙睛，梯度洗脱。见表1。 表1流动相条件 时间/min 流速/（μL/min） 0.1%乙酸/% 乙腈/% 0.0 300 70 30 2.0 300 20 80 10.0 300 20 80 10.1 300 70 30 25.0 300 70 30 7.3.1.3 进样量：10μL。 7.3.1.4 柱温：30℃。 7.3.2 质谱/质谱参考条件 7.3.2.1 电离方式：电喷雾电离，正模式和负模式。 7.3.2.2 扫描方式：多反应监测（MRM）。 7.3.2.3 其他仪器条件参见附录A。 7.3.3标准曲线的绘制 取标准工作溶液，按浓度由小到大的顺序，依次分析标准工作溶液，以各个化合物中在含有同位素 内标的系列混合标准工作溶液中的浓度和其对应的峰面积与内标的峰面积之比绘制标准曲线（即2，4- 基-4-甲氧基二苯甲酮-D5、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯与尼泊金丙酯-D7的峰面 积比），内标法定量。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录B中图B.1。 7.3.4定性 按照上述条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致 （变化范围在土2.5%之内）：样品中目标化合物的定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液一致，相 对丰度偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的待测物。 表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% <10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.3.5定量 待测样液中目标化合物的响应值应在标准曲线线性范围内 3 SN/T4137—2015 7.4空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 结果计算和表述 8 按式（1)计算试样中2,4-二羟二苯甲酮、2,2'，44'-四羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、尼 泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯含量，计算结果需扣除空白值： A,Xm. X, : .(1) A.Xm 式中： X, 甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯的含量，单位为微克每千克（ug/kg）； A, 样品中2,4-二羟二苯甲酮、22，44-四羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、尼泊金 甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯的峰面积与相应内标峰面积比值； 泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯标准的质量，单位为纳克（ng)； 金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯的峰面积与相应内标峰面积比值； 样品质量，单位为克（g）。 9定量限、正确度（回收率） 9.1 1定量限 酮、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯均为10.0μg/kg。 9.2 正确度（回收率） 带鱼、黄鱼、羊栖菜、紫菜、海带、虾中2,4-二羟二苯甲酮、2,2°，4，4-四羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲 氧基二苯甲酮、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯的添加回收率数据参见附录C。 信息服务平台 4 SN/T 4137—2015 附录A （资料性附录） 参考质谱条件1) 参考质谱条件： a) 电喷雾电压（IS)：-4500V;5000V； 雾化气压力(GS1)：344.5kPa; b) 气帘气压力（CUR）：68.9kPa； c) (p 辅助气流速（GS2）：275.6kPa； 离子源温度（TEM)：450℃； e) f) 其他质谱参数见表A.1。 表 A.1 主要参考质谱参数 定性离子对 化合物 电喷雾电压/V DP/V CE/eV CXP 扫描方式 (m/2) 213.2/135.1 -70 -27 -10 ESI 2,4-二羟二苯甲酮 4500 213.2/91.1 70 -36 -10 ESI- 245.1/135.1 70 22 -10 ESI 2,2，4,4-四羟基二苯甲酮 -4500 245.1/109.1 70 22 -10 ESI 218.2/135.1* -85 -28 -10 ESI 2,4-二羟二苯甲酮-D5 -4 500 218.2/91.1 85 36 10 ESI 40 27 10 ESI+ 229.2/151.1 2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮 5000 229.2