ICS 67.050 SN C 53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 38472019 代替SN/T3847—2014、SN/T2220—2008 出口食品中苯二氮卓类药物残留量的测定 液相色谱一质谱/质谱法 Determination of benzodiazepines residues in foodstuffs for export- 2019-12-27发布 2020-07-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T3847—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T3847一2014《出口食品中苯二氮卓类药物的测定液相色谱-质谱/质谱法》和 SN/T2220-2008《进出口动物源性食品中苯二氮卓类药物残留量检测方法液相色谱-质谱质 谱法》。 本标准与SN/T3847一2014和SN/T2220—2008相比，主要技术变化如下： 修改了适用范围和化合物种类。SN/T3847一2014和SN/T2220一2008的适用范围分别为 保健食品和动物源性食品，本标准同时适用于保健食品和动物源性食品中苯二氮卓类药物的检测， 并增加了鱼肉、鸡肉、鸡蛋、牛奶、蜂蜜、肠衣等基质。与SN/T3847一2014相比，增加了化合物 α-羟基阿普唑仑；与SN/T2220一2008相比，增加了普拉西泮、去甲西泮、替马西泮、氯巴占、硝 西洋、氯甲西泮、艾司唑仑、劳拉西洋、氯硝西泮等化合物。 -本标准将SN/T3847—2014和SN/T2220—2008测定步骤合并，并做了适当修改，如将 SN/T2220一2008标准中提取溶液的pH值改为11.0。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆海关、中华人民共和国上海海关、中华人民共和国厦门 海关。 本标准主要起草人：李贤良、存显、陈念念、唐柏斌、曾静、任硕、邓晓军、徐敦明。 本标准所代替标准的历次版本发布为： -SN/T2220—2008 ; SN/T3847—2014 SN/T 3847—2019 出口食品中苯二氮卓类药物残留量的测定 液相色谱一质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口保健食品和动物源性食品中普拉西洋、去甲西洋、氯氮卓、替马西、三唑 仑、氯巴占、奥沙西泮、硝西泮、氟西洋、氯甲西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、劳拉西泮、氯硝西泮、 氟硝西泮、地西泮、咪达唑仑、去烷基氟西、去甲基氟硝西洋、α-羟基咪达唑仑、7-氨基氟硝西 洋、2-羟乙基氟西泮、α-羟基阿普唑仑等苯二氮卓类药物的液相色谱－质谱/质谱检测方法 本标准适用于保健食品（片剂、冲剂、胶囊、糖浆、口服液等剂型）中苯二氮卓类药物含量和动 物源性食品（猪肉、猪肝、鱼肉、鸡肉、鸡蛋、牛奶、蜂蜜、肠衣等）中苯二氮卓类药物残留量的测 定和确证。 2规范性引用文件 本为准 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 式出# 保健食品试样中的苯二氮卓类药物用二氯甲烷-乙醚混合溶液提取，提取液经浓缩后，液相色 谱-串联质谱仪测定，内标法定量 动物源性食品试样中的苯二氮卓类药物采用β-盐酸葡萄糖醛苷酶水解，在碱性条件下用乙酸乙 酯-异丙醇混合溶液提取，阳离子交换小柱净化后，液相色谱－串联质谱仪测定，内标法定量 4试剂和材料 慧服务平台 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合CB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：高效液相色谱级。 4.2乙睛：高效液相色谱级。 4.3甲酸：高效液相色谱级。 4.4二氯甲烷：高效液相色谱级。 4.5乙酸铵。 4.6 乙酸乙酯。 4.7 异丙醇。 4.8 3乙醚。 冰乙酸。 4.10 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备用。 4.11 硼砂（NaB,O,：10H,0）。 SN/T3847—2019 4.12氢氧化钠。 4.13浓盐酸：浓度为12mol/L。 4.14氨水：浓度为28% 4.15β-盐酸葡萄糖醛苷酶溶液：活力≥100000units/mL。 4.16乙酸铵缓冲溶液：0.02mol/L，pH=5.2。称取1.54g乙酸铵（4.5）溶解于900mL水中，用冰 乙酸（4.9）调节pH值到5.2±0.1，最后用水稀释到1L，贮存于4℃C冰箱中，使用期为1个月。 4.172mol/L氢氧化钠溶液：称取8g氢氧化钠（4.12）溶于90mL水中，冷却至室温，用水定容至 100 mL。 4.18硼砂-氢氧化钠缓冲液：称取7.6g硼砂（4.11）溶解于900mL水中，用2mol/L氢氧化钠溶液（4.17） 调节pH值到11.0±0.1，最后用水稀释到1L。 4.19 4.20乙酸乙酯-异丙醇溶液：取1000mL乙酸乙酯（4.6），加入200mL异丙醇，混匀。 4.21乙睛-水溶液：取20mL乙腈（4.2），加人80mL水，混匀。现配现用。 4.220.1mol/L盐酸溶液：准确量取9mL浓盐酸（4.13），用水稀释到1L，摇匀后备用。 4.23乙腈-氨水溶液：取98mL乙腈（4.2），加入2mL氨水（4.14），混勺。使用前配制。 4.242mmol/L乙酸铵溶液（含0.2%甲酸）：准确称取0.154g乙酸铵（4.5），用适量水溶解，加人 2mL甲酸（4.3），用水稀释至1000mL，混匀。 4.25苯二氮卓类药物标准物质：标准物质信息见附录A。标准物质均为1.0mg/mL的甲醇（4.1） 溶液，同位素内标标准物质为100.0μg/mL甲醇（4.1）溶液。× 低于5℃保存，有效期为6个月。 4.27同位素内标标准工作溶液：用乙睛（4.2）分别稀释同位素内标标准溶液至终浓度为100.0ng/mL， 低于5℃保存，有效期为6个月。 4.28标准工作液：根据需要，临用时吸取定量的标准中间溶液（4.26）和同位素内标工作溶液 （4.27），用乙睛-水溶液（4.21）稀释配制成适当浓度的标准工作溶液（参考线性浓度范围为1.0ng mL至50.0ng/mL），每毫升标准工作溶液含有同位素内标物质各10.0ng。现配现用。 4.29混合阳离子交换小柱：3mL，60mg或相当者，使用前用5mL甲醇（4.1）和5mL水活化。 4.30微孔滤膜：0.22μm，有机系。 5 仪器和设备 信息服务平台 5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI） 5.2 电子天平：感量为0.01g和0.1mg。 超声波清洗器。 5.4涡旋混合器。 5.5恒温箱。 5.6氮吹仪。 5.7离心机：转速5000r/min以上。 5.8 组织捣碎机。 5.9容量瓶：10mL、50mL、100mL。 5.10具塞塑料离心管：50mL。 2 SN/T3847—2019 6试样的制备与保存 6.1胶囊、片剂、冲剂：取有代表性样品约100g，用碾钵碾碎（胶囊、片剂同时将糖衣和胶囊壳碾 碎），装入洁净容器内，密封并做好标识，于常温保存。 6.2糖浆、口服液：取有代表性样品约100g，搅拌均匀后装人洁净容器内，密封并做好标识，于4℃ 冰箱内保存。 6.3肌肉、内脏、肠衣、鸡蛋：取有代表性样品约500g，用组织捣碎机捣碎，装人洁净容器内，密 封并做好标识，于-18℃冰箱内保存。 6.4牛奶、蜂蜜：取有代表性样品约500g，搅拌均匀后装入洁净容器内，密封并做好标识，于4℃ 冰箱内保存。 7测定步骤 7.1提取 7.1.1保健食品（胶囊、片剂、冲剂、糖浆、口服液） 准确称取2g试样（精确到0.01g于50mL具塞离心管中，加人10mL硼砂-氢氧化钠缓冲液（4.18）， 用2mol/L的氢氧化钠溶液（4.17）调节pH值至11.0左右，添加100.0ng/mL的同位素内标工作溶液（4.27） 100μL于待测样品中，加入20mL二氯甲烷－乙醚溶液（4.19），加盖混匀后超声10min，涡旋振荡5min， 5000r/min离心5min；取上层有机相于100mL旋蒸瓶中，再用20mL二氯甲烷-乙醚溶液（4.19）重 复提取两次，合并提取液，在不高于40℃下用氮吹仪吹干。加入1.0mL乙睛-水溶液（4.21）振荡 溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜（4.30）后，滤液供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.1.2动物源性食品（猪肉、猪肝、鱼肉、鸡肉、鸡蛋、牛奶、蜂蜜、肠衣） 称取5g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加入15.0mL乙酸铵缓冲溶液（4.16）， 涡旋混合2min。添加100.0μL同位素内标工作溶液（4.27）于待测样品中。加25μL的β-盐酸葡萄 糖醛苷酶溶液（4.15），加盖后振荡2min，于恒温箱中在37℃酶解16h。酶解后溶液用氨水（4.14） 调节pH值至11.0左右，用15mL乙酸乙酯-异丙醇溶液（4.20）振荡提取5min，在5000r/min离 心5min，上清液过无水硫酸钠（4.10）于250mL梨形瓶中，重复上述提取操作。合并提取液，在不 高于40℃下用氮吹仪吹干。加入5.0mL0.1mol/L的盐酸溶液（4.22）溶解残渣，待净化。 7.2净化 转移待净化液（7.1.2）至活化后的混合阳离子交换小柱（4.29）的顶部，以0.5mL/min流速过柱。 用5mL水淋洗后，用8mL乙睛-氨水溶液（4.23洗脱，收集洗脱液，在不高于40℃下用氮吹仪吹干。 质谱/质谱仪测定。 7.3测定