SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4252—2015 出口动物源性食品中咪唑苯残留量 检测方法 液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法 Determination of imidocarb residues in foodstuffs of animal origin for export-HPLC method and LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2015-05-26发布 2016-01-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 出口动物源性食品中咪唑脲苯残留量 检测方法 液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法 SN/T4252-2015 中国标准出版社出版 务平台 北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029） 北京市西城区三里河北街16号（100045） 总编室：（010)68533533 网址www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×1230 1/16 印张 1.5 字数40千字 2016年3月第一版 2016年3月第一次印刷 印数1—1100 * 书号：155066·2-29577 定价24.00元 SN/T4252—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院，中华人民共和国河北出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：李晓娟、李玮、王凤池、艾连峰、彭涛、陈冬东、代汉慧、段文仲。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4252—2015 出口动物源性食品中咪唑脲苯残留量 检测方法 液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口动物源性食品中咪唑脲苯残留量的液相色谱测定与液相色谱-质谱/质谱确证 方法。 本标准适用于牛肉、羊肉、牛肝、羊肝、牛肾、羊肾、牛奶中咪唑脲苯残留量的测定及确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 效液相色谱测定，外标法定量，液相色谱-质谱/质谱法确证 4试剂和材料 4 除另有说明外，所用试剂均为分析纯 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 三氟乙酸：色谱纯。 4.4 氢氧化钠：分析纯。 4.5 乙酸铵：优级纯。 4.6 甲酸：分析纯。 4.7 乙酸：分析纯。 4.8 0.1%三氟乙酸水溶液：取1.0mL三氟乙酸（4.3），用水稀释并定容至1000mL，混匀 4.9 1%三氟乙酸水溶液：取1.0mL三氟乙酸（4.3），用水稀释并定容至100mL，混勺。 4.10提取液：1%三氟乙酸水溶液-乙腈（2+8.体积比）。取20mL1%三氟乙酸水溶液（4.9），取80mL 乙腈，混匀。 4.11洗脱液：5%三氟乙酸甲醇溶液。取5mL三氟乙酸（4.3），用甲醇稀释并定容至100mL，混匀。 4.120.1%甲酸水溶液：取0.1mL甲酸（4.6），用水稀释并定容至100mL，混匀。 4.13定容液：0.1%甲酸水溶液-乙腈（7+3，体积比）。取70mL0.1%甲酸水溶液，取30mL乙腈， 1 SN/T4252—2015 混匀。 4.140.5mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠（4.4），用200mL水溶解，混匀。 4.150.1%乙酸-乙酸铵溶液（0.5mmol/L）：称取0.04g乙酸铵（4.5），加人0.5mL乙酸（4.7），用水稀 释并定容至500mL，混匀。 4.16弱阳离子交换与反相吸附混合型固相萃取柱：OasisWCX（60mg，3mL），或相当者。使用前用 3mL乙腈活化，待用。 4.17标准品：咪唑脲苯，CASNo27885-92-3纯度大于等于98%。 4.18标准储备液：准确称取咪唑脲苯10mg（精确至0.1mg），用甲醇溶解并定容至100mL，配置成浓 度约为100μg/mL的标准储备液。该溶液于4℃以下避光保存，有效期为6个月 4.19标准工作液：根据需要用定容液（4.13）将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作溶液，标准工作 溶液需现用现配。 5仪器与设备 5.1液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2液相色谱-串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源。 5.3分析天平：感量为0.01g和0.1mg。 5.4组织捣碎机。 5.5离心机。 5.6均质器。 5.7固相萃取装置。 5.8旋涡混合器。 5.9氮气吹扫浓缩仪。 6样品制备与保存 6.1肌肉、内脏样品 取代表性样品约500g，取可食部分并切割成小块，用组织捣碎机捣碎并混合均匀，分成2份，分别 装入洁净的容器中，密封并标识。将试样置于一18℃以下保存 6.2牛奶样品 取代表性样品约500g，充分混匀，分成2份，分别装入洁净的容器中，密封并标识。将试样置于 4℃以下避光保存。 6.3在取样、制样和试样保存过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 服务平台 7分析步骤 7.1提取 7.1.1肉、肝、肾脏样品 称取5.00g试样（精确至0.01g），置于50mL具塞离心管中，加人15mL提取液（4.10），均质提取 1min，然后以4500r/min的转速离心8min，将上清液转移至50mL具塞刻度试管中，残渣再用 10mL提取液（4.10）按上述步骤重复提取两次，合并上清液，并用提取液（4.10）定容至35mL。分取出 7mL样液（相当于1.0g样品）于另一离心管中，向样液中缓慢滴加氢氧化钠溶液（4.14）调节样液的 2 SN/T 4252—2015 pH值约为8.0，然后以4000r/min的转速离心5min，待净化。 7.1.2牛奶 称取5.00g试样（精确至0.01g），置于50mL具塞刻度离心管中，加入提取液（4.10）并定容至 25mL，涡旋混合2min，然后以4500r/min的转速离心8min，分取出5mL样液（相当于1.0g样品） 于另一离心管中，向样液中缓慢滴加氢氧化钠溶液（4.14)调节样液的pH值约为8.0，然后以4000r/min 的转速离心5min，待净化。 7.2净化 将样液（7.1）转移至WCX固相萃取柱上（4.16），控制样液通过固相萃取柱的流速低于 2.0mL/min，再依次用2mL水和3mL甲醇淋洗，弃去全部流出液，用5mL洗脱液（4.11）进行洗脱， 收集洗脱液。洗脱液在45℃下氮气吹扫浓缩至干，加入1mL定容液（4.13）溶解残渣，样液过0.2um 滤膜，供液相色谱或液相色谱-串联质谱测定。 7.3液相色谱测定 7.3.1液相色谱参考条件 参考条件如下： a) 色谱柱：CLOVER-Cls柱，150mmX4.6mm，粒度5μm，或相当者； 柱温：30℃； c) 进样量：20μL； d) 流速：1.0mL/min; 检测波长：240nm； e) f) 流动相组成及梯度洗脱条件：见表1。 表1液相色谱流动相组成及梯度洗脱条件 时间/min 0.1%三氟乙酸溶液/% 乙腈/% 0.0 84 16 4.0 84 16 4.1 06 10 9.0 90 9.1 16 14.0 84 16 7.3.2定量测定 在仪器最佳状态下，采用相同的分析条件，对标准工作溶液和样液等体积参插进样。以咪唑脲苯色 谱峰峰面积对其标准溶液浓度绘制标准工作曲线。试样中咪唑脲苯的响应值应在线性范围内，若其响 应值超过线性范围，可调整样液的定容体积使之满足定量线性范围的要求。在上述仪器条件下，咪唑 苯的保留时间为5.2min。咪唑脲苯标准溶液的液相色谱图参见附录A。 3 SN/T 4252—2015 7.4 液相色谱-质谱/质谱确证 7.4.1 液相色谱参考条件 参考条件如下： a) 色谱柱：XDB-Phenyl,150mmX2.1mm（内径），填料粒度5μm； b) 柱温：30℃； c) 进样量：2μL； d) 流速：0.3mL/min； e) 流动相组成及梯度洗脱条件见表2。 表2液相色谱的流动相及梯度洗脱条件 时间/min 0.1%乙酸-乙酸铵溶液（0.5mmol/L)/% 甲醇/% 1.0 90 10 2.0 20 80 5.0 20 80 5.1 90 10 8.0 90 10 7.4.2 质谱参考条件 参考条件如下： 离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI十）； a) b) 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）； c) 毛细管电压：4500V； d) 干燥气温度：350℃； e) 干燥气流量：11 L/min 标准 f) 雾化器压力：35psi； g) 碰撞气：氮气； h) 其他质谱参数：见表3。 表3MRM质谱参数 母离子 子离子 驻留时间 裂解电压 碰撞能量 化合物 m/ m/2 ms V 188.1 100 100 27 咪唑豚苯 349.2 162.1 100 100 21 7.4.3定性和确证 在上述条件下测定试样和标准溶液，如果样液中检测的色谱峰的保留时间与标准工作溶液检测的 色谱峰的保留时间相一致（允许偏差在士2.5%之内）；液相色谱中检测到的色谱峰经过液相色谱-质谱） 质谱确证，其相对丰度比满足表4中所规定的范围要求，则可判定为样品中残留咪唑脲苯。咪唑脲苯