SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4653—2016 出口中药材中氨基甲酸酯类农药残留量的 检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of carbamate residues in Chinese herbal medicine for export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4653—2016 前言 本标准按照为GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：杨惠琴、时逸吟、盛永刚、樊彦莉、伊雄海、邓晓军、朱坚。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4653—2016 出口中药材中氨基甲酸酯类农药残留量的 检测方法液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了中药材中灭多威、异丙威、西维因、仲丁威、猛杀威、残杀威、克百威、恶虫威、灭蚜威、 灭虫威、3-羟基-克百威和抗威残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于出口济银花、苏叶、杭菊、甘草、山楂、白芷、黄连、枸杞、人参、红花中灭多威、异丙威、 西维因、仲丁威、猛杀威、残杀威、克百威、恶虫威、灭蚜威、灭虫威、3-羟基-克百威和抗蚜威残留量的确 证和定量测定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 采用乙睛提取，ASE萃取试样中残留的氨基甲酸酯类农药，提取液经石墨化炭黑/氨基固相萃取柱 净化，液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。 4试剂材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 4.1 乙睛：色谱纯。 4.2甲苯：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.42 乙酸铵：优级纯。 4.5海砂。 4.65mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）：准确称取0.385g乙酸铵，加入1mL甲酸，用水溶解并 转移至1000mL容量瓶中，定容至刻度。 4.7乙腈溶液（含0.1%甲酸）：1mL甲酸溶解于乙睛中，转移至1000mL容量瓶，定容至刻度 4.8 乙腈-甲苯混合液（3+1，体积比）：量取100mL甲苯，加人300mL乙睛，混匀备用。 4.9农药标准物质：灭多威methomyl.CAS号：16752-77-5；异丙威isoprocarb，CAS号：2631-40-5；西 维因carbaryl，CAS号：63-25-2；仲丁威fenobucarb，CAS号：3766-81-2；猛杀威promecarb，CAS号： 2631-37-0；残杀威Propoxur，CAS号：114-26-1；克百威carbofuran，CAS号：1563-66-2；恶虫威bendio- carb，CAS号：22781-23-3；灭蚜威ethionfencarb，CAS号：29973-13-5；灭虫威methiocarb，CAS号： 2032-65-7；3-羟基-克百威carbofuran-3-hydroxy，CAS号：16655-82-6；抗蚜威pirimicarb，CAS号： 23103-98-2纯度均大于98%。 1 SN/T4653—2016 4.10标准储备液的配制：分别准确称取适量的标准物质（4.9），用乙睛配制成浓度为1.0mg/mL的标 准储备溶液。该溶液在一18℃冰箱中保存，有效期为1个月。 4.11混合标准中间溶液的配制：分别准确移取一定体积的标准储备液（4.10），用乙睛稀释成 10.0μg/mL的混合标准中间工作液，现配现用。 4.12混合标准工作溶液的配制：分别移取适量混合标准中间工作溶液（4.11），用空白样品基质溶液配 成适当浓度的混合标准工作溶液，现用现配。 4.13石墨化炭黑/氨基固相萃取柱：6mL,500mg或相当者。 4.14微孔滤膜：0.45μm，有机滤膜。 5仪器与设备 5 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子（ESI)。 5.2加速溶剂萃取仪：配有33mL萃取池，或相当者。 5.3电子天平：感量分别为0.01g0.001g。 5.4固相萃取装置。 5.5 氮吹仪。 5.6涡漩混匀器。 5.7旋转蒸发仪。 5.8研钵。 5.9[ 圆底烧瓶：250mL 5.10 聚四氟乙烯试管：50mL。 5.11 刻度玻璃试管：15mL。 6 试样的制备与保存 6.1 试样制备 取代表性样品500g，全部粉碎后混匀，均分成两份试样，装人洁净的容器内，密封并标明标记 6.2 试样保存 试样于常温状态下保存。 注：在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7分析步骤 7.1提取 称取约2.0g样品（精确至0.01g）于聚四氟乙烯试管中，加人适量的海砂后转移人研钵拌匀后，装 入33mL加速溶剂萃取池，用乙睛作为提取溶剂，按设定的提取程序运行：温度80℃，压强1500psi， 加热5min，静态萃取5min，循环1次。然后用池体积60%的乙睛冲洗萃取池，并用氮气吹扫60s。提 取完成后，将提取液收集于圆底烧瓶中，35℃水浴中旋转蒸发至1mL。 注：上述所列加速溶剂萃取仪参数是在ASE200上完成的，仅供参考。 7.2净化 用10mL乙睛-甲苯混合溶液（4.8）活化石墨化碳黑/氨基小柱，弃去淋洗液。将上述的提取液 2 SN/T4653—2016 (7.1)转移至小柱中过柱，并用10mL乙睛-甲苯混合溶液（4.8）洗脱（在整个活化、上样和洗脱过程中应 避免SPE柱干凋）。收集洗脱液于15mL刻度试管中并于40℃下氮吹浓缩至近干，准确加人5.0mL 5mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）（4.6）溶解残渣，过0.45μm有机滤膜，供液相色谱-质谱/质谱 仪检测。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：C1s色谱柱，长50mm，内径4.6mm，粒径1.8μm，或相当者； b) 柱温：30℃； c) 流速：0.4mL/min； (P 进样量：20μL； e) 流动相：A：乙腈（含0.1%甲酸）,B：5mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）；梯度洗脱程序见 表1。 表1流动相、流速及梯度洗脱条件 时间 流速 流动相A% 流动相B% min mL/min 0 0.40 5 95 2 0.40 5 96 7 0.40 95 5 12.0 0.40 95 5 12.1 0.40 5 95 7.3.2 质谱条件 质谱条件如下： 电离方式：电喷雾电离（ESI)； a) b) 扫描方式：正离子模式； 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）； 准信息服 c） 其他参考质谱条件见附录A。 7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定 7.3.3.1定性测定 每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中各组分定性离子的相对丰 度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定 的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 3 SN/T4653—2016 7.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，对混合基质标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，混合基质标准工作溶 液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应 在仪器测定的线性范围内。如果含量超过标准曲线范围，应稀释到适合浓度后分析，标准溶液的多反应 监测（MRM)色谱图参见附录B中的图B.1。 7.4空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8结果计算和表述 用色谱处理软件中的外标法绘制标准曲线，试样中各氨基甲酸酯残留量分别按式（1)计算。计算结 果需扣除空白值： cX1000 X= :(1) 式中： 样品中待测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准曲线中得到各氨基甲酸酯标准工作溶液的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）； V 样品定容体积，单位为毫升（mL）； 样品称样量，单位为克（g）。 9 方法的测定低限和回收率 9.1 测定低限 本方法的测定低限：0.0125mg/kg 9.2 回收率 在三个添加浓度范围内，济银花、苏叶、杭菊、甘草、山楂、白芷、黄连、枸杞、人参、红花中氨基甲酸酯 准信息服务平台 残留量的回收率数据见附录C中C1表。 SN/T4653—2016 附录A （资料性附录） 质谱条件1) 质谱条件如下： a) 电喷雾电压(IS)：4000V； b) 雾化气压力（GS1）：70Psi； c) 气帘气压力（CUR）：5Psi； (p 辅助气流速（GS2)：60Psi； e) 离子源温度（TEM）：400℃； f) 碰撞电压（CE）、去簇电压（DP)、碰撞室入口电压（EP)、碰撞室出口电压（CXP)见表A.1所示。 表 A.1 氨基甲酸酯类及内标碰撞电压、去簇电压参数表 序号 化合物 子离子（Q3) CE DP 母离子（Q1) EP CXP 88.0* 12.5 34 7 3 1 灭多威 163.1 106.0 14 40 4 5 95.1* 19 50 7 5 2 异丙威 194.2 137.2 13