SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4671—2016 进出口棉花中草甘膦及其代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of glyphosate and its metabolite residue in cotton for import and export- Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4671—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局检验检疫技术中心、中华人民共和国浙江 出入境检验检疫局丝类检测中心。 本标准主要起草人：黄超群、谢文、陆勋元、董锁拽、吴娟、童赞恺、谢韵第、何建敏。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4671—2016 进出口棉花中草甘麟及其代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口棉花中草甘麟及其代谢物氨甲基麟酸农药残留量的液相色谱-质谱/质谱仪 方法。 本标准适用于棉花中草甘麟及其代谢物氨甲基麟酸的测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 定量。 4试剂和材料 除特殊注明外，所用试剂均为色谱纯，所用水为符合GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇。 4.3乙酸铵。 4.4 硼酸钠：分析纯。 苏甲氧羰酰氯（FMOC-CI)：纯度不低于97.0%，低于5℃保存。 4.6 乙酸铵溶液：5mmol/L，称取0.39g乙酸铵（4.3），用水溶解并定容至1000mL。 硼酸盐缓冲溶液：5%，称取5g硼酸钠（4.4），用水溶解并定容至100mL。 4.8 FMOC-Cl丙酮溶液：20g/L，称取0.2gFMOC-Cl(4.5），用丙酮溶解并定容至10mL。 4.9标准物质：草甘膦，CAS号1071-83-6，纯度不低于98%；氨甲基麟酸CAS号1066-51-9，纯度不低 于98%；草甘膦-13C15N100μg/mL;氨甲基膦酸-13C15N,100μg/mL。 4.10标准储备液：分别准确称取适量的草甘麟和氨甲基麟酸标准物质（精确至0.1mg），用水溶解并定 容，配制成浓度为100μg/mL的标准储备液，4℃保存。 释并定容，配制成浓度为1.0ug/mL的混合标准中间液I，4℃保存； 容，配制成浓度为1.0μg/mL的混合标准中间液Ⅱ 4.13标准工作液：根据需要，移取一定混合标准中间液I和Ⅱ，用水配制成浓度分别为0.5ug/L、 1 SN/T 4671—2016 酸-13C15N的浓度为0.005μg/mL。 4.14微孔滤膜：0.22μm，水相。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g。 5.3振荡器：频率250r/min。 5.4禾 移液器：容量为20uL～200L和100L～1000uL。 6试样制备与保存 取10g以上有代表性的试样，剪碎至2mm×2mm以下，混匀。 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 7分析步骤 7.1样品前处理 准确称取0.5g试样（精确至0.01g），置入50mL塑料离心管中，准确加人125μL1.0μg/mL同位 素内标工作液（4.12）和25mL水，振摇30min后，过滤。取1.0mL滤液，加人100μL硼酸盐缓冲溶液 （4.7)和50μLFMOC-C1丙酮溶液（4.8）进行衍生化反应，常温放置过夜。将反应后溶液过0.22μm滤 膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.2标准工作液衍生化 准确移取1.0mL标准工作液，加人100μL硼酸盐缓冲溶液（4.7）和50uLFMOC-Cl丙酮溶液 （4.8）进行衍生化反应，常温放置过夜。将反应后溶液过0.22um滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 业标准 7.3仪器条件 7.3.1 液相色谱条件 a) 色谱柱：Cis，100mm×2.1mm（内径），3.5um，或相当者； b) 流动相：甲醇-5mM乙酸铵溶液，梯度洗脱程序见表1； 表 1 梯度洗脱程序 时间/min 5mmol/L乙酸铵溶液/% 甲醇/% 80 0.0 20 4.0 80 20 10.0 40 60 14.0 40 60 15.0 80 20 18.0 80 20 2 SN/T 4671—2016 流速：0.25mL/min； d) 进样量：10μL； 7.3.2 质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：负离子扫描； b) c) 检测方式：多反应监测； (P 鞘气、辅助气均为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气；使用前应调节各气体压力，以使质谱灵敏度 达到检测要求； e) 电喷雾电压、碰撞能量等参数应优化至最优灵敏度，相关参数及监测离子对信息参见附录A 7.4定量测定 按7.3仪器条件测定标准工作溶液和样液，以色谱峰面积内标曲线法计算样液中的草甘麟和氨甲 基麟酸的含量。如果样液中草甘膦麟和氨甲基膦酸的含量超出标准曲线范围，应用水稀释后再进行衍生 测定。在上述条件下，草甘麟及其内标草甘麟-13C15N的参考保留时间约为9.8min，氨甲基麟酸及其 内标氨甲基麟酸-13C15N的参考保留时间约为12.7min。标准溶液多反应监测色谱图参见附录B 中图 B.1。 7.5定性测定 按照上述仪器条件测定样液和标准工作溶液，如果样液与标准工作液中待测物质色谱峰相对保留 时间偏差在土2.5%范围内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对 丰度允许误差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。 表2相对离子丰度最大容许误差 相对离子丰度(基峰) 50~100 20~50 10~20 <10 % 最大容许误差 ±20起 ±25 ±30 ±50 % 唯信息服务平 7.6空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行 8结果计算和表示 用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中草甘麟（或氨甲基麟酸）的残留量： cXV×1000 X= .(1) mX1000 式中： X；一试样中草甘麟（或氨甲基麟酸)的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)； 从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 3 SN/T 4671—2016 最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）； m 计算结果应扣除空白值。 计算结果保留至小数点后三位。 测定低限和回收率 9 9.1 测定低限 本方法对于棉花中草甘麟及其代谢物氨甲基麟酸的测定低限均为0.05mg/kg 9.2 回收率 本方法添加水平及回收率数据参见附录C中表C.1。 行业标准信息服务平台 SN/T 4671—2016 附录A （资料性附录） 仪器参数与监测离子对信息1） 仪器参数与监测离子对信息： a) 电喷雾电压：3000V； b) 离子源温度：300℃； c) 鞘气压力：50Arb； d) 辅助气压力：20Arb； e) 毛细管温度：300℃； f) 碰撞气压力：1.5mTorr； 监测离子对信息、碰撞能量等参数见表A.1。 g) 表A.1草甘膦、氨甲基膦酸及其内标物的监测离子对和碰撞能量 监测离子对 碰撞能量 化合物 m/z V 390.0/168.0* 10 草甘膦 390.0/150.0 25 草甘膦-13C215N 393.0/171.0 15 332.0/136.0* 15 氨甲基膦酸 332.0/110.0 10 氨甲基膦酸-13CIN 333.0/111.2 13 注：带*为定量离子 标准信息服务平台 1) 非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在TSQQuantumULTRAAM液质联用仪上完成的，此处列出试 5