SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4263—2015 出口食品中多种食欲抑制剂的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of multi-appetite suppressants in food for export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2015-05-26发布 2016-01-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4263—2015 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院，中华人民共 和国黑龙江省出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：马微、李晓娟、王俊苏、刘磊、代汉慧、马强、朱明达、王海波、何浩。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4263—2015 出口食品中多种食欲抑制剂的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口食品中芬氟拉明、苯丙醇胺、西布曲明、舍曲林、安非他酮、西酞普兰、氟西汀、苯 氟雷司的液相色谱-质谱/质谱检测和确证。 本标准适用于片剂、胶囊、散剂、饼干、口服溶液、咖啡和茶中8种食欲抑制剂的检测和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件。仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 将试样中的8种食欲抑制剂用甲醇溶液超声提取，用0.1%甲酸-甲醇混合液稀释；采用液相色谱 质谱/质谱检测，外标法定量。 试剂和材料 4 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇:HPLC级。 4.2甲酸：纯度99%,HPLC级 4.3 乙酸铵：优级纯。 4.410mmol/L乙酸铵溶液：精确称取0.771g乙酸铵（4.3），超纯水溶解，稀释至1000mL。 4.50.1%甲酸溶液：移取1.0mL甲酸用水定容至1000mL。 4.6 0.1%甲酸-甲醇混合液（3+7，体积比）：移取30mL0.1%甲酸水溶液和70mL甲醇，混勾。 4.7标准物质：芬氟拉明、苯丙醇胺、西布曲明、舍曲林、安非他酮、西酞普兰、氟西汀、苯氟雷司标准品： 纯度大于等于95%，见附录A。 4.8标准储备溶液：分别称取0.01g（精确至0.0001g）的标准品，除舍曲林用少量水溶解，用甲醇定 容，其他标准品均用甲醇溶解定容至100mL，配成浓度为100.0mg/L的标准储备溶液，置于一18℃保 存，有效期3个月。 4.9混合标准中间溶液：分别吸取适量的8种食欲抑制剂标准储备液于100mL容量瓶中，用甲醇定容 至刻度，配成混合标准中间液。使得混合标准工作溶液中芬氟拉明250ng/mL、苯内醇胺500ng/mL、 西布曲明100ng/mL、舍曲林500ng/mL、安非他酮500ng/mL、西酞普兰1000ng/mL、氟西汀 1000ng/mL、苯氟雷司500ng/mL。置于一18℃保存，有效期1个月。 工作溶液，需现用现配。 4.11塑料离心管：50mL，具塞。 1 SN/T 4263—2015 4.12 0.22um滤膜：双性滤膜。 5仪器和设备 超高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2分析天平：感度为0.001g和0.1mg。 5.3 涡旋混合器。 超声波清洗器。 5.5 离心机:10000r/min。 6 试样制备 6.1片剂 随机取同一批号的供试品20片，研细混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封并标明标记。 6.2胶囊 随机取同一批号的供试品20粒，倾出所有内容物混匀，均分成两份，分别装人洁净容器中，密封并 标明标记。 6.3饼干 随机取同一批号的供试品10片，研细混匀，均分成两份，分别装人洁净容器中，密封并标明标记。 6.4散剂 随机取同一批号的供试品10袋，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封并标明标记。 6.5 5咖啡 随机取同一批号的供试品10袋，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封并标明标记。 6.6 茶剂 随机取同一批号的供试品10袋，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封并标明标记。 6.7口服溶液剂 服务平台 随机抽取同一批号的供试品10支（瓶），取等量体积溶液到同一洁净容器中混匀，均分成两份，密封 并标明标记。 6.8注意事项 在取样、制样过程中，应防止样品受到污染或发生目标物含量的变化。 7分析步骤 7.1提取 7.1.1片剂、胶囊、散剂、饼干、咖啡和茶叶样品 称取1.0g试样（精确至0.01g）于具塞锥形瓶中，加人20mL甲醇溶液（4.1），盖上盖混匀，置于超 2 SN/T 4263—2015 声波清洗器中超声15min，萃取完毕后转置离心管中，以6000r/min离心5min。取1.0mL于5mL 容量瓶中，用0.1%甲酸-甲醇混合液（4.6）定容后并混匀，溶液过0.22um滤膜，供液相色谱-质谱/质谱 进行测定。 7.1.2口服溶液剂 准确移取1.0mL试样于10mL容量瓶中，用0.1%甲酸-甲醇混合液（4.6）定容至刻度，过0.22um 滤膜，供液相色谱-质谱/质谱进行测定。 7.2液相色谱-质谱/质谱测定 7.2.1色谱参考条件 色谱参考条件如下： 色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3柱，2.1mmX100mm，粒度1.8μm，或相当者； a) b) 流动相：甲醇-10mmol/L乙酸铵水溶液，梯度洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱程序 时间 10mmol/L乙酸铵水溶液 流速 曲线 步骤 甲醇% % Curve min mL/min 1 0 95 5 0.45 1 2 4 5 95 0.45 6 3 6 5 95 0.45 6 4 7 96 5 0.45 6 5 10 95 5 0.45 6 c) 柱温：30℃； 业标准信息服务 d) 进样量：5L； e) 样品室温度：20℃。 7.2.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下： 离子源：电喷雾离子源； a) b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； 使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录B。 (P 7.2.3定量测定 根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。混合标准工作 液和待测液中8种食欲抑制剂的响应值均应在仪器线性响应范围内。对混合标准工作液和样液等体积 进行测定。在上述色谱条件下，8种食欲抑制剂的参考保留时间分别约为：苯丙醇胺1.92min、芬氟拉 明3.22min、西酞普兰3.47min、氟西汀3.82min、安非他酮4.0min、舍曲林4.22min、苯氟雷司4.40min、西 布曲明5.51min。标准溶液的MRM图参见附录C。 3 SN/T 4263—2015 7.2.4定性测定 按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准 工作溶液一致，允许偏差小于士2.5%。定性离子对的相对丰度应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰 度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 7.2.5空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 8 结果计算和表述 用液相色谱-质谱/质谱数据处理机或按式（1)计算试样中食欲抑制剂含量，计算结果扣除空白值： AX5 X= m 式中： X 试样中食欲抑制剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg)或者微克每升（μg/L）； 由标准工作曲线计算得到的试样中食欲抑制剂的浓度，单位为微克每升（ug/L）； c V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）或者所代表的试样体积单位为毫升（mL）。 u 计算结果需扣除空白值。 行业标准 测定低限和回收率 9 9.1 测定低限 测定低限见表3。 表3 不同样品中8种食欲抑制剂的测定低限 片剂 饼干 散剂 咖啡 胶囊 茶叶 口服溶液 化合物 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg μg/L 苯丙醇胺 0.5 0.5 0.5 5.0 5.0 5.0 5.0 芬氟拉明 0.2 0.2 0.2 2.0 2.0 2.0 2.0 西酞普兰 0.8 0.8 0.8 8.0 8.0 8.0 8.0 氟西汀 0.8 0.8 0.8 8.0 8.0 8.0 8.0 安非他酮 0.5 0.5 0.5 5.0 5.0 5.0 5.0 舍曲林 0.5 0.5 0.5 5.0 5.0 5.0 5.0 苯氟雷司 0.5 0.5 0.5 5.0 5.0 5.0 5.0 西布曲明 0.1 0.1 0.1 1.0 1.0 1.0 1.0 4 SN/T 4263—2015 9.2 回收率范围 回收率见表4。 表 4 不同样品中8种食欲抑制剂的添加回收率 添加 回收率范围 添加 回收率范围 添加 回收率范围 浓度 % 浓度 % 浓度 % 化合物 mg/kg μg/L mg/kg 片剂 散剂 饼干 口服液 茶叶 咖啡 胶囊 80.3~87.280.8~88.6 80.6~90.4 82.7~93.6 0.5 5.0 5.0 80.1