ICS 67.050 SN CCS X 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5441—2022 出口水产品中三卡因、苯佐卡因、喹哪啶 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of Tricaine,Benzocaine and Quinaldine residues in aquatic products for export-HPLC/MS/MS method 2022-03-14发布 2022-10-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5441—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国厦门海关技术中心、福建省农业科学院农业质量标准与检测技术 研究所、长春海关技术中心、厦门标普标准化服务有限公司。 本文件主要起草人：郑向华、孙婷、康明芹、徐敦明、严丽娟、陈燕、林立毅、林建忠、张志刚、傅建炜、 陈智勇。 SN/T 5441—2022 出口水产品中三卡因、苯佐卡因、喹 残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件规定了出口水产品中三卡因、苯佐卡因、喹哪啶残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于鱼、虾、蟹、贝类、牛蛙等水产品可食组织中三卡因、苯佐卡因、喹哪啶残留量的检测和 确证。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 4方法提要 试样中三卡因、苯佐卡因、喹哪啶残留量用磷酸盐缓冲液-甲醇混合溶液提取，经固相萃取柱净化 后，用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。 5试剂和材料 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 信息服务平 5.1乙腈：色谱纯。 5.2甲醇：色谱纯。 5.3甲酸。 5.4磷酸氢二钠。 5.5柠檬酸。 5.60.2mol/L磷酸氢二钠：准确称取磷酸氢二钠28.4g，用水溶解并定容到1000mL容量瓶中，混 匀备用。 5.70.1mol/L柠檬酸：准确称取柠檬酸19.21g，用水溶解并定容到1000mL容量瓶中，混匀备用。 5.80.1%甲酸溶液：准确吸取1mL甲酸（5.3）于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度线，混匀备用。 5.9磷酸盐-柠檬酸缓冲液：量取磷酸氢二钠溶液（5.6)437mL和柠檬酸溶液（5.7)563mL混勾，现配 现用。 5.10 07.5%甲醇溶液：量取7.5mL甲醇（5.2）于100mL容量瓶中，加水定容至刻度线，混匀备用。 1 SN/T5441—2022 5.11磷酸盐缓冲溶液-甲醇混合溶液（50+50，体积比）：量取磷酸盐-柠檬酸缓冲液（5.9）100mL和甲 醇100mL，混匀备用。 5.12标准物质：三卡因（Ci.H1,NO,S，CAS号：886-86-2）、苯佐卡因（C,HNOz，CAS号：94-09-7） 哪啶（C1H.N.CAS号：91-63-4），纯度均大于等于99.0%。 5.13标准储备液：分别准确称取适量的三卡因、苯佐卡因、喹哪啶标准物质，用甲醇配制成 1000mg/L的标准储备液，一18℃下避光保存，有效期6个月。 5.14混合标准工作液的配制：吸取适量标准储备溶液（5.13），用甲醇稀释配制成10.0mg/L的混合 标准溶液，4℃下避光保存，有效期1个月。 5.15基质空白溶液：将不同基质的阴性空白样品分别按照8.1和8.2净化处理后得到的溶液。 释至浓度为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的标准系列溶液，使用前配制。 用前依次用6mL甲醇，6mL磷酸盐-柠檬酸缓冲液（5.9)活化 5.18微孔滤膜：0.22μm，有机相型。 6仪器与设备 6.1液相色谱串联四极杆质谱仪：配电喷雾正离子源（ESI 6.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 6.3组织捣碎机。 6.4旋涡混合器。 6.5均质器。 出版文本为准 6.6离心机：转速不低于5000r/min。 6.7冷冻离心机：转速不低于15000r/mil 6.8氮吹浓缩仪。 6.9离心管：50mL聚丙烯离心管。 业标准信 6. 10 固相萃取装置。 7 试样的制备与保存 7.1试样制备 取代表性样品约500g，将其可食部分先切碎，经组织捣碎机充分捣碎均匀加工成浆状，混匀，装人 洁净容器内，密封并注明标记。 7.2试样保存 将试样于一18℃以下冷冻存放。 8分析步骤 8.1样品提取 称取1g样品（精确至0.01g）于50mL离心管中（6.9），加人磷酸盐缓冲溶液-甲醇混合溶液 2 SN/T 5441—2022 （5.11)5mL，均质器高速匀浆30s，均质器刀头用5mL磷酸盐缓冲溶液-甲醇混合溶液（5.11)清洗，将 清洗液与匀浆合并，涡旋2min后，样品于5000r/min离心3min，上清液转移至另一50mL离心管 （6.9)中；在离心管剩余残渣内再加人10mL磷酸盐缓冲溶液-甲醇混合溶液（5.11），涡旋2min， 5000r/min离心5min。将两次提取液合并，混匀，待净化（部分样品脂肪含量较高，上清液有明显絮 状物，可于15000r/min于一10℃下冷冻离心10min，取上清液净化）。 8.2净化 将混合液（8.1)转移至预活化好的固相萃取柱中（5.17），上样后，先用6mL甲醇溶液（5.10）分两 次淋洗，抽至近干后用6mL甲醇分3次洗脱，洗脱液收集于10mL玻璃试管中，40℃下缓慢均匀氮吹 浓缩至近干，残渣用乙睛（5.1)定容至1.0mL。涡旋混匀后，过微孔滤膜（5.18），供液相色谱-质谱/质 谱仪检测。 8.3测定 8.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) b) 柱温：35℃。 流速：300μL/min c) d) 进样量：2μL。 e) 流动相及梯度洗脱条件见表1。 表1流动相及梯度洗脱条件 时间/min 0.1%甲酸溶液/% 乙腈/% 0.00 98.0 2.0 2.00 98.0 2.0 2.10 60.0 40.0 6.00 60.0 40.0 6.10 40.0 60.0 10.00 40.0 60.0 10.10 2.0 98.0 12.00 2. 0 98.0 12.10 98.0 2.0 15. 00 98.0 2.0 3