ICS 67.050 SN CCS C 53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5437—2022 出口动物源食品中苯海拉明残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of diphenhydramine residue in foodstuffs of animal origin for export-LC-MS/MS method 2022-03-14发布 2022-10-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国合肥海关技术中心、中华人民共和国青岛海关、中华人民共和国 天津海关。 本文件主要起草人：吕亚宁、韩芳、郑平、王萍、张利刚、宋伟、丁磊、周典兵、盛旋。 SN/T5437—2022 出口动物源食品中苯海拉明残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件规定了出口动物源食品中苯海拉明残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾、猪肠和牛奶等动物源性食品中苯海拉明残留量的定量 测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 4方法提要 试样中的苯海拉明用三氯乙酸-乙睛溶液提取，提取液经强阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱 质谱/质谱仪测定，内标法定量 5试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 信息服务平台 5.1乙睛：色谱纯。 5. 2 甲醇：色谱纯。 5. 3 甲酸：色谱纯。 5. 4 正已烷：色谱纯。 5.5 三氯乙酸。 5.6 氨水：含量为25%~28%。 5.7 苯海拉明标准物质：C17H22CINO.CAS号.147-24-0，纯度大于等于99%。 5.8 氛代苯海拉明标准溶液：CiHgDNO.CAS号.170082-18-5，100μg/mL。 5.9 1%三氯乙酸溶液：称取10g三氯乙酸（4.5），用水溶解，定容至1000mL，混匀。 （5.1），混匀，现用现配。 5.1120%氨水甲醇溶液：量取20mL氨水（5.6）和80mL甲醇（5.2），混。 1 SN/T 5437—2022 5.120.1%甲酸溶液：量取1.0mL甲酸（5.3），用水定容至1000mL，混匀。 5.130.1%甲酸-乙腈溶液（95+5，体积比）：量取5mL乙睛（5.1），用0.1%甲酸溶液（5.12）定容至 100 mL. 5.14苯海拉明标准储备液：准确称取适量盐酸苯海拉明标准品（5.7），用少量水溶解后，再用乙睛 （5.1）定容，配制成浓度为100mg/L的标准储备液，于0℃～4℃冷藏避光保存，有效期6个月。 5.15苯海拉明标准中间液：准确吸取苯海拉明标准储备液（5.14）1mL于100mL容量瓶中，用乙睛 （5.1）定容至刻度，配制成浓度为1mg/L的标准中间液，于0℃~4℃冷藏避光保存，保存期3个月。 中，用乙睛（4.1）定容至刻度，配制成浓度为500μg/L的内标工作液，于0℃～4℃冷藏避光保存，保存 期3个月。 5.17标准工作溶液：准确吸取一定量苯海拉明标准中间液（5.15）和苯海拉明一D：内标工作液 （5.16），用0.1%甲酸溶液-乙溶液（5.13）配制成浓度分别为1ug/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、 期1个月。 5.18CNWBONDSCX固相萃取柱：苯磺酸型强阳离子交换柱，500mg.6ml.或相当者。使用前依 5.19微孔滤膜：通用型，0.22μm。 6仪器和设备 6.1 6.2分析天平：感量分别为0.0001g和0.01g。 6.3组织捣碎机。 6.4均质器：转速不低于10000r/min。 6.5超声波振荡器。 6.6冷冻离心机：转速不低于8000r/min。 6.7 固相萃取装置。 6.8氮吹仪。 6.9 涡旋混合器 6. 10 pH计。 6. 11 离心管：聚乙烯，具塞，50mL 6. 12 比色管：25mL。 7试样的制备和保存 7. 1猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾和猪肠 取有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎，均分成两份，分别装人洁净的容器内，密封并标 明标记。如非立即进行前处理，于一18℃下冷冻保存。 7.2牛奶 取有代表性样品约500g，充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器，密封并标明标记，于0℃~ 4℃冷藏保存。 2 SN/T 5437—2022 8测定步骤 8.1提取与净化 8.1.1猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾和猪肠 作液（5.16）和20mL1%三氯乙酸-乙睛溶液（5.10），10000r/min均质提取1min，再超声提取 15min，于转速8000r/min，温度4℃以下，离心10min。收集上清液于25mL比色管（5.12）中，用氨 水（5.6）调节pH至5，加水定容至25mL.待净化 精确移取5mL提取液.以不超过1mL/min的流速通过已活化的SCX固相萃取柱（5.18）.待样液全 部通过后，依次用5mL水、5mL甲醇（5.2)淋洗小柱，弃去全部流出液，减压抽至近干。先后用6mL20% 氨水甲醇溶液（5.11）和4mL乙睛（5.1)洗脱，收集全部洗脱液，于40℃下氮气吹干，准确加人1.0mL 0.1%甲酸-乙睛溶液（5.13）溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜（5.19），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 8.1.2牛奶 称取约2g试样（精确到0.01g）于50mL具塞离心管中，准确加人20μL苯海拉明一D内标工作 液（5.16)和15mL1%三氯乙酸-乙腈溶液（5.10），超声提取15min。提取液用氨水（5.6）调节pH至 5，待净化。 将全部提取液以不超过1mL/min的流速通过已活化的SCX固相萃取柱（5.18），待样液全部通过 后，依次用5mL水、5mL甲醇（5.2）淋洗小柱，弃去全部流出液，减压抽至近干。先后用6mL20%氨 水甲醇溶液（5.11)和4mL乙睛（5.1)洗脱，收集全部洗脱液，于40℃下氮气吹干，准确加入1.0mL 0.1%甲酸-乙睛溶液（5.13)溶解残渣，过0.22um微孔滤膜（5.19），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 8.2 测定 8.2. 1 液相色谱条件 液相色谱条件参考如下： 液相色谱柱：Clg柱，1.8μm，2.1mm×50mm（内径）或相当者； a) b) 柱温：30℃； c) 流速：0.3mL/min； d) 流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为乙睛，流动相梯度洗脱程序见表1。 进样量：5μL。 e) 表1流动相梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0.00 95.00 5. 00 1. 00 95.00 5.00 2.00 60.00 40.00 4.00 60.00 40.00 4.01 95.00 5.00 5.00 95.00 5.00 3