ICS 67.050 SN CCS X 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5450—2022 动物源食品中9种双稠吡咯啶类生物碱的 测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of 9 pyrrolizidine alkaloids in animal-origin food- Liquid chromatography tandem mass spectrometry method 2022-03-14发布 2022-10-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5450—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国南京海关、中华人民共和国石家庄海关、中华人民共和国重庆海 关、中华人民共和国青岛海关、中华人民共和国杭州海关。 本文件主要起草人：丁涛、殷耀、宋卫得、郭思言、张文国、姜珊、季美泉、赵翌龙、马育松、谢文、吴 永苹。 SN/T 5450—2022 动物源食品中9种双稠吡咯啶类生物碱的 测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件规定了动物源食品中9种双稠吡咯啶类生物碱的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于蜂蜜、乳及乳制品、畜禽肉（牛、猪、鸡）及其内脏中野百合碱、克氏千里光宁碱、倒千 里光碱、千里光菲灵碱、千里光宁、立可沙明碱、天芥菜碱、毛果天芥菜碱、蓝蓟定9种双稠吡略咯啶类生物 碱残留量的测定。 2 规范性引用文件 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T6682 2分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 4方法提要 蜂蜜样品用0.1mol/L盐酸溶液溶解，乳及乳制品用5% 三氯乙酸溶液沉淀蛋白，畜禽肉及内脏制 品用5%乙酸乙睛溶液提取，混合型强阳离子交换固相萃取柱富集净化，高效液相色谱-质谱/质谱进行 标准信： 测定，外标法定量。 5试剂和材料 服务平台 5.1乙腈。 5.2甲酸。 5.3乙酸。 5.4甲醇：分析纯和色谱纯。 5.5醋酸铵：色谱纯。 5.6浓盐酸（36%~38%）。 5.7浓氨水（25%~28%）。 5.8三氯乙酸。 5.9标准品：野百合碱（C16H23NO，CAS号：315-22-0），克氏千里光宁碱（C1H27NO，CAS号：2318- 18-5），倒千里光碱（C18H25NO，CAS号：480-54-6），千里光菲灵碱（CiH23NOs，CAS号：480-81-9），千 1 SN/T 5450—2022 里光宁（C18H25NOs，CAS号：130-01-8），立可沙明碱（C18H25NOs，CAS号：10285-07-1），天芥菜碱 （CiH27NOCAS号：303-33-3），毛果天芥菜碱（C2HNO，CAS号：303-34-4），蓝蓟定（C20HNOz， CAS号：520-68-3），纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.10盐酸溶液（0.1mol/L)：取9mL浓盐酸（5.6）用水定容至1000mL。 5.115%三氯乙酸溶液：取50g三氯乙酸（5.8）用水定容至1000mL。 5.125%氨水-甲醇溶液：取5mL浓氨水（5.7)用分析纯甲醇定容至100mL。 5.131%乙酸乙腈溶液：取10mL乙酸（5.3）用分析纯乙腈定容至1000mL。 5.15混合型强阳离子固相萃取柱（60mg或相当者）：使用前依次用3mL甲醇、3mL水，3mL 0.1mol/L盐酸活化，保持柱体湿润。 5.16标准储备液：分别称取9种双稠吡咯啶类生物碱标准品（5.9）各10mg于10mL容量瓶中，用色 谱纯甲醇（5.4)溶解，配制成1mg/mL的标准储备液。再分别准确吸取1mg/mL的9种单标准储备 液，用色谱纯甲醇（5.4）逐级稀释到10μg/mL和1μg/mL的混合标准溶液，于4℃冰箱保存。 5.17标准工作溶液：吸取适量1μg/mL标准储备液（5.16），用色谱纯甲醇5.4）释成浓度范围为 20ng/mL300ng/mL系列标准工作溶液，现配现用。 5.18滤膜：有机相、水相0.22μm。 5.19 定性滤纸。 6主要仪器和设备 6.3氮吹仪。 6.4 涡旋振荡混合器。 6.6固相萃取仪。 6.7 6.8 组织绞碎机。 7样品制备与保存 取混合均匀蜂蜜、乳及乳制品、畜禽肉及其肝脏代表样品后装入洁净容器内，密封，标明标记，蜂蜜 8测定步骤 8.1供试样品提取和净化 称取2g蜂蜜样品（精确至0.01g)于50mL带盖聚四氟乙烯离心管中，加人10mL0.1mol/L盐 酸（5.10），涡旋混合均匀后准备净化。 称取5g液态乳或2g乳粉样品（精确至0.01g）于50mL带盖聚四氟乙烯离心管中，加入10mL 5%三氯乙酸溶液（5.11），涡旋1min，超声20min，高速离心后定性滤纸过滤，滤液准备净化。 混合型强阳离子固相萃取柱（5.15)预先用3mL分析纯甲醇和3ml0.1mol/L盐酸活化，将样品 溶液以小于1mL/min流速过柱，依次用3mL水和3mL分析纯甲醇淋洗，加入5mL5%氨水-甲醇溶 2 SN/T 5450—2022 液（5.12）洗脱，收集的洗脱液于40℃下氮气吹干，用1.0mL甲醇水（5.14）溶液溶解，依次过有机和水 相滤膜（5.18）后供高效液相色谱串联质谱测定分析测定 准确称取5g动物内脏及肉样品于50mL带盖聚四氟乙烯离心管中，加入20mL乙酸乙腈溶液 （5.13），涡旋后超声20min，高速离心后过定性滤纸，残渣再加入15mL乙酸乙睛溶液（5.13）重复提取 1次，合并过滤溶液，于40℃水浴温度下旋转蒸发至干，用1.0mL甲醇水（5.14）定容，依次过有机和 水相滤膜（5.18)后供高效液相色谱串联质谱测定分析测定。 8.2测定 8.2.1仪器条件 8. 2. 1. 1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a） 色谱柱：EpicCsMS4.6mm（内径）×150mm，3μm或相当者； 流动相流速：0.5mL/min； 柱温：40℃； 进样量：20μL； 梯度洗脱，流动相A为甲醇，流动相B为0.1%（v/v）甲酸-5mmol/L醋酸铵溶液，参考洗脱程 e) 序见表1。 表1高效液相色谱参考梯度洗脱程序 时间/min 流速/（mL/min） 流动相A/% 流动相B/% 0 0.5 10 90 3 0.5 10 90 4. 5 0.5 06 10 10 06 10 11 0. 5 10 90 13 10 06 标准信息服 0. 5 8. 2. 1. 2 质谱参考条件 质谱参考条件如下： a) 电离方式：电喷雾（ESI十）； 扫描方式：正离子扫描； c) 检测模式：多反应监测（MRM）； 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测 (P 要求.参考条件及监测离子对（m/z）参见表A.1 8.2.2 液相色谱-串联质谱测定 8.2.2.1定性测定 按照液相色谱-串联质谱条件测定试样和基质混合标准工作液，试样中目标化合物的保留时间与基 质混合标准工作液中对应化合物的保留时间偏差在士2.5%之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的 基质混合标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，且每个离子的信噪比均3，则 3