ICS 65.020.30 SN CCS B 41 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5481—2022 进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of Gentamycin in edible animal and feeds for import and export -LC-MS/MS 行业标准信息服务平台 以正立 2022-07-07发布 2023-02-01实施 中华人民共和国海关总署发布 以正式出版文本为准 SN/T 5481—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国成都海关。 本文件主要起草人：于刚、谭志、李永丽、何开蓉、俞凌云、肖宇、林华、李丹丹。 以正式出版文本为准 1 以正式出版文本为准 SN/T 5481—2022 进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件规定了食用动物、饲料中庆大霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于进出口工作中牛、猪、羊、鸡的血清，牛、猪、羊的尿液和猪饲料中庆大霉素的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 试剂和材料 4 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3三氯乙酸：优级纯。 4.4七氟丁酸（Heptafluorobutyricacid，HFBA)：HPLC级 4.5甲酸：色谱纯。 4.6标准物质：庆大霉素硫酸盐（C1gHagN,O·HSO,），含量高于99.0%。 4.7标准储备溶液：1.0mg/mL。称取4.6所达标准物质适量，用水配成1.0mg/mL的标准储备溶 液于塑料容量瓶中，2℃～8℃保存。 4.8标准工作溶液（10.0μg/mL）：吸取4.7所述各标准储备溶液1mL于100mL塑料容量瓶中，用 水定容至刻度,2℃～8℃保存。 4.9三氯乙酸溶液（5%）：称取三氯乙酸10.0g，用水200mL溶解（常温下保存2个月）。 4.10七氟丁酸（HFBA）水溶液（500mmol/L）：准确量取12.8mL七氟丁酸，用水稀释至200mL （4℃避光保存，有效期1个月）。 4.11七氟丁酸（HFBA）水溶液（50mmol/L）：准确量取4.10中七氟丁酸溶液10mL，用水稀释至 100mL（4℃避光保存，有效期1个月）。 4.12七氟丁酸（HFBA）水溶液（5mmol/L）：准确量取4.11中七氟丁酸溶液10mL，用水稀释至 100mL（4℃避光保存，有效期1个月）。 4.13 I SN/T 5481—2022 至 100 mL。 4.14HLB固相萃取柱（60mg/3mL）。 4.150.22μm水相滤膜。 5 仪器设备 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2天平：感量分别为0.01g和0.0001g。 5.3氮吹浓缩仪。 5.4高速冷冻离心机（最高转速可达15000r/min）。 5.5 固相萃取装置。 6 样品的采集与保存 6.1血样的采集 采集动物血样约10mL，待自然凝固后分离血清，分装于聚四氟乙烯材质小管，加盖密封。 6.2尿样的采集 采集动物尿样约10mL，12000r/min离心10min后，上清液分装于聚四氟乙烯材质小管，加盖 密封。 6.3饲料试样 采集饲料样品约500g。在实验室粉碎混勾，四分法至约20g后分装于小塑料袋，密封。 6.4试样的保存 将分装后的血清、尿样于一20℃保存，饲料样品于4℃保存。 行业标准信 7测定步骤 7.1提取 7.1.1血清和尿样试样 称取约2g血清或尿样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入3mL三氯乙酸溶液（4.9），涡旋 振荡1min，在4℃下10000r/min离心5min，取上清液置于15mL离心管中。用2mL三氯乙酸溶 液重复提取1次，合并提取液，加2mL七氟丁酸（HFBA)水溶液（4.11）混匀，备用。 7.1.2饲料试样 称取约2g试样（精确至0.01g），加入5mL三氯乙酸溶液（4.9），涡旋振荡3min，在4℃下以 10000r/min离心5min，取上清液层置于15mL塑料离心管中。用5mL三氯乙酸溶液（4.9）重复提 取1次，合并提取液，加2mL七氟丁酸（HFBA）水溶液（4.11），混匀，备用。 7.2净化 固相萃取柱（HLB)（4.14)依次用甲醇、水、七氟丁酸（HFBA)水溶液（4.12)各3mL活化，取备用 2 SN/T 5481—2022 液上柱，用水5mL淋洗，甲醇3mL洗脱，收集洗脱液于塑料离心管中，置于40℃水浴中轻微氮气流吹 干，用七氟丁酸（HFBA)水溶液（4.12)1.0mL溶解残渣，经0.22μm滤膜过滤后，待测。 7.3基质工作曲线的配制 取空白试样（不含有庆大霉素的动物生物样品或饲料），按7.1和7.2进行提取净化，获得基质提取 液。分别吸取适量标准工作溶液（4.8），依次加人相应试剂瓶中，用基质提取液定容至1.0mL，获得 0.05mg/L、0.2mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L和5.0mg/L的系列基质标准工作溶液。 7.4测定条件 7.4.1液相色谱-质谱参考条件 7. 4. 1. 1 色谱柱：Ci8.3μm，2.1X100mm，或相当者。 7. 4. 1. 2 流速：0.3mL/min。 7.4.1.3柱温箱温度：35℃。 7.4.1.4进样量：5μL。 7.4.1.5流动相：10mmol/LHFBA水溶液（A)和乙睛（B）。梯度洗脱条件见表1。 表 1 梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相 B/% 0. 0 06 10 3 0 10 90 6. 0 10 90 6. 5 06 10 10. 0 90 10 7.4. 1. 6 离子源：电喷雾离子源。 7. 4. 1.7 扫描方式：正离子扫描。 7. 4. 1. 8 检测方式：多反应监测。 7.4.1.9 电喷雾电压：5500V。 7. 4. 1. 10 气帘气压力：20psi。 7. 4. 1. 11 辅助气压力：GAS160psi,GAS2.60psi 7. 4. 1. 12 离子源温度：550℃。 7.4.1. 13 定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量，见表2。 表2庆大霉素定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量 被测物名称 离子对/(m/z) 去簇电压/V 碰撞能量/eV 478.4/157.1 50 22 庆大霉素（C1) 478.4/322.2a 50 41 a为定量离子。 7.4.2测定 7.4.2.1定性测定 在相同试验条件下，样品溶液中的被测物的保留时间与基质标准工作溶液中被测物的保留时间比 3