ICS65.020.01 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3785—2020 葡萄扇叶病毒的定性检测 实时荧光PCR法 Qualitative detection of grapevine fanleaf virusReal time fluorescence PCR method 行业标准信息服务平台 2020-11-12发布 2021-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3785—2020 前品言 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所 食典通 本标准主要起草人：范旭东、董雅凤、张尊平、任装、甜国君。 行业标准信息服务平台 NY/T3785—2020 葡萄扇叶病毒的定性检测 实时荧光PCR法 1 范围 本标准规定了葡萄植株和离体繁殖材料中葡萄扇叶病毒的实时荧光PCR检测方法。 本标准适用于葡萄植株和离体繁殖材料中葡萄扇叶病毒的 定性检测。 2规范性引用文件 凡是不注日期的引用文 GB/T 6682 水规格和试验 分析实验 3缩略语 下列缩略语 cDNA互补 脱 式反应 PCR：聚合 DNA：脱拿 核胶 尼影 M-MLV: uS反转录 dNTPs:4 氧物 （包括dATP.dGTLdTI.deTP）混合 DEPC:焦 七酯 RNA：核糖核 Taq：水生柄热 RNase：核糖 Tris-HCl:盐配酸 4原理 根据葡萄扇叶病毒 物2A 开性序列， 对用王葡萄扇口 每PCR检测的特异性 引物。首先利用反转录酶将RNA反转录 DNAU以CNA 为模板进行 时荧光PCR反应，SYBR Green|荧光染料掺人DNA双链发射荧光信 而不掺大中的染料分 发射任何荧光信号，从而保 证荧光信号的增加与PCR产物的 全同步。通过实时荧光PR仪检测荧光信号，将其转换成扩增 服务平台 曲线，并通过扩增曲线的数据来进行结果判定 5仪器与设备 5.1实时荧光PCR检测仪。 5.2超微量紫外核酸蛋白检测仪。 5.3电子天平：感量为0.01g。 5.4高速冷冻离心机：转速在12000r/min以上。 5.5恒温金属浴。 5.6微量移液器：量程分别为0.1μL~2.5μL、0.5μ~10μ、5μL~20μ10μ~100μL、20μL~ 200μL,100μL~1000μL.