ICS 13.100 CCS C 52 团 体 标 准 T/WSJD 19.4 —2021 职业接触人群生物监测方法 尿中N-甲基甲酰 胺的气相色谱法 Biological monitoring of occupational population — Determination of N -methylformamide in urine by gas chromatography 2021-09-14发布 2021-10-01实施 中国卫生监督协会 发布 全国团体标准信息平台 T/WSJD 19.4—2021 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020给出的规则起草。 本文件由中国卫生监督协会提出并归口。 本文件起草单位：杭州医学院、杭州市职业病防治院、杭州市萧山区疾病预防控制中心、杭州市上 城区疾病预防控制中心 。 本文件主要起草人： 徐承敏、钱亚玲、唐红芳、阮征、王晗、柴剑荣、路艳艳、刘丹华、朱海豹、 潘吉、叶海朋、邵吉、李峰、吴昊、焦冬、张海娟、孙思雨、陆龙根、孙川。 全国团体标准信息平台 T/WSJD 19.4—2021 1 职业接触人群生物监测方法 尿中N-甲基甲酰 胺的气相色谱法 1 范围 本文件规定了尿中 N-甲基甲酰胺的测定方法。 本文件适用于二甲基甲酰胺职业接触人群尿中 N-甲基甲酰胺（ NMF）浓度的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GBZ/T 295 职业人群生物监测方法 总则 WS/T 97 尿中肌酐分光光度测定方法 WS/T 98 尿中肌酐的反相高效液相色谱测定方法 3 原理 尿液样品经冷冻、离心、甲醇沉淀蛋白后，用极性毛细管色谱柱分离尿中 N-甲基甲酰胺，经氮磷 检测器检测，以保留时间定性，用 峰面积或峰高 定量。 4 仪器设备与耗材 4.1 具盖聚乙烯塑料瓶， 50 mL。 4.2 具盖聚乙烯塑料离心管， 5 mL、10 mL。 4.3 离心机， 3000 r/min 。 4.4 微量注射器， 1 µ L、10 µL。 4.5 气相色谱仪， 具氮磷检测器。 5 试剂 5.1 去离子水（ ρ≥18.2MΩ）。 5.2 甲醇，色谱纯 。 5.3 甲醇溶液 ，体积分数为 80％。 5.4 N-甲基甲酰胺（ NMF），标准物质或色谱纯试剂 。 5.5 标准贮备溶液：准确称取一定量的 N-甲基甲酰胺 ，用甲醇 溶液稀释并定容到一定体积， 配制成 标准贮备液； 该溶液在 4 ℃条件下可稳定 保存 14 d。 5.6 标准应用溶液：临用时用甲醇 溶液将标准贮备溶液 稀释成浓度为 0.50 mg/mL 的标准应用溶液 ① 和浓度为 0.02 mg/mL 的标准应用溶液 ②。 全国团体标准信息平台 T/WSJD 19.4—2021 2 6 样品的采集、运输和保存 依据 GBZ/T 295 ，采集职业接触二甲基甲酰胺劳动者工作班末尿 50 mL于具盖聚乙烯塑料瓶中密闭； 样品在冷藏条件下运输； 样品置于-18℃条件下可稳定保存 14 d。 按照尿液样品采集方法采集去离子水作为样品空白，与样品一起运输和保存。 7 分析步骤 7.1 仪器操作参考条件 a) 色谱柱： 30 m×0.53 mm×1.0 μm ，键合 /交联聚乙二醇 （PEG）； b) 柱温： 100℃， 保持 1 min；以 25℃/min 升温至 170℃， 保持 3 min；以 10℃ /min升温至 210℃， 保持 3 min； c) 进样口温度： 250℃； d) 检测器温度： 320℃； e) 载气（氮气）流量： 6.0 mL/min ； f) 进样体积： 0.2 µL； g) 氢气的关闭和开启时间 ：1.0 min关，2.2 min开。 7.2 标准系列溶液的配制和测定 取6只10 mL容量瓶，准确加入 0.00 mL、0.20 mL、1.00 mL的标准应用溶液 ②和0.20 mL、1.00 mL、 4.00 mL的标准应用溶液 ①，用甲醇 溶液定容，配制 成N-甲基甲酰胺 浓度为 0 µ g/mL、0.40 µ g/mL 、2.00 µ g/mL、10.0 µ g/mL 、50.0 µ g/mL 、200.0 µ g/mL 的标准系列溶液；参照仪器操作条件，将气相色谱仪调 节至最佳测定状态，测定标准系列溶液，以保留时间定性，以测得峰面积或峰高 与相应的 N-甲基甲酰胺 的浓度（µ g/mL）计算线性回归方程 。 7.3 样品处理 将尿液样品放置在室温解冻后，混匀，取 10 mL尿液置于 10 mL具塞离心管中，以 3000 r/min 离心 10 min， 准确量取上清液 1.00 mL移至另一 5 mL具盖离心管中， 加入 4.00 mL甲醇溶液， 混匀， 再以 3000 r/min 离心 10 min，吸出上清液供测定。 用测定标准系列溶液的操作条件测定样品 和样品空白 溶液，测得的样品峰面积或峰高后，由线性回 归方程得到样品溶液中 N-甲基甲酰胺 的浓度（ µ g/mL）。若样品中 N-甲基甲酰胺 浓度超出测定范围，可 用甲醇溶液稀释后测定，计算时乘以稀释倍数 。 7.4 样品测定质量控制 采样容器、检测器皿、试剂、样品空白、检测过程质量控制等按照 GBZ/T 295 的要求进行。 7.5 肌酐测定 依据 WS/T 97和WS/T 98检测肌酐。 8 结果计算与表述 8.1 按式（ 1）计算尿中 N-甲基甲酰胺的浓度 全国团体标准信息平台 T/WSJD 19.4—2021 3 50=………………………………………………… （1） 式中： ρ——尿中 N-甲基甲酰胺 浓度，单位为毫克每升（ mg/L）； ρ0——测得样品溶液中 N-甲基甲酰胺 的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； 5——尿前处理的稀释因子 。 8.2 按式（ 2）计算尿中 N-甲基甲酰胺肌酐校正值 Cr0= …………………………………………………… （2） 式中： ω——肌酐校正后尿中 N-甲基甲酰胺的浓度，单位为毫克每克肌酐（ mg/g Cr）； ρ0——尿中 N-甲基甲酰胺 的浓度， 单位为毫克每升（ mg/L）； ρCr——尿中的肌酐浓度， 单位为克每升（ g/L）。 9 说明 9.1 方法检出限为 0.04 mg/L ；最低检出浓度为 0.2 mg/L；方法定量下限 为0.13 g/mL，最低定量浓 度为 0.65 mg/L （以取尿 1.0 mL用甲醇定容至体积 5 mL计）；测定范围为 0.40 g/mL ~200.0 g/mL；相对标准偏差为 0.7％~3.4％；加标回收率为 92.0％~102.5％。 9.2 若采用微量注射器手动进样，需将最终标准系列和 样品溶液 用甲醇溶液稀释 5 倍，进样体积调 整为 1.0 µ L。 9.3 测定过高浓度 样品溶液 后，若接着测定低浓度 样品溶液 ，则以甲醇溶液进样数次以清洗色谱系 统，直至无干扰峰。 9.4 当工作场所空气中二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺共存时，接触者的尿中除代谢物 N-甲基甲酰胺 外，还有 N-甲基乙酰胺 、甲酰胺、乙酰胺，以及未转化的二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺 ，其色谱分离 结果见图 1。结果表明 5种酰胺均不干扰 尿中 N-甲基甲酰胺的测定。 图1 尿中N-甲基甲酰胺与共存物色谱分离图 _________________________________ 全国团体标准信息平台