ICS 11.120.01 C 23 团体标准 T/CACM 1326.10—2019 两面针种子超低温保存技术规程 Technical code of practice for cryopreservation of Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC. seeds 2019 - 10 - 17发布 2019 - 10 - 17实施 中 华 中 医 药 学 会 发布 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.10—2019 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 4 种子的采收及选择 ................................ ................................ .. 2 4.1 种子采收 ................................ ................................ ...... 2 4.2 种子选择 ................................ ................................ ...... 2 5 种子前处理 ................................ ................................ ........ 2 5.1 活力 ................................ ................................ .......... 2 5.2 含水量范围 ................................ ................................ .... 2 6 种子保存量 ................................ ................................ ........ 3 7 种子冷冻方式 ................................ ................................ ...... 3 8 恢复培养 ................................ ................................ .......... 3 8.1 种子解冻处理 ................................ ................................ .. 3 8.2 冻后种子活力检测 ................................ .............................. 3 8.3 萌芽成苗 ................................ ................................ ...... 3 附录A（规范性附录） BTB的配制和保存方法 ................................ .............. 4 参考文献 ................................ ................................ ............. 5 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.10—2019 II 前 言 本标准是药用植物顽拗性种子超低温保存系列标准之一，该系列标准结构和名称如下： —— T/CACM 1326.1 药用植物顽拗性种子超低温 保存技术通则； —— T/CACM 1326.2 白木香种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.3 降香种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.4 益智种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.5 高良姜种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.6 朱砂根种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.7 草豆蔻种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.8 化州柚种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.9 樟种子超低温保存技术规程； —— T/CACM 1326.10 两面针种子超低温保存技术规程； ………… 。 本标准按照 GB/T 1.1 —2009《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由中国医学科学院药用植物研究所海南分所提出 。 本标准由 中华中医药学会归口。 本标准起草单位： 中国医学科学院药用植物研究所海南分所、 中国医学科学院药用植物研究所。 本标准主要起草人：曾琳 、魏建和、郑希龙、李榕涛、王秋玲、何明军、金钺、顾雅坤、符丽。 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.10—2019 1 两面针种子超低温保存技术规程 1 范围 本标准规定了两面针 [Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.] 种子超低温保存过程中的术语和定义、 种子的选择、种子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等内容。 本标准适用于两面针种子的超低温长期贮藏。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 两面针 Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC. 芸香科（ Rutaceae ）花椒属（ Zanthoxylum L.）多年生植物，别称入地金牛 。具有活血化瘀、解 毒消肿、行气止痛等功效，在胃火牙痛等方面有独特的疗效。 为《中华人民共和国药典》（ 2015版） 收载的临床常用中药材。 3.2 两面针果实 Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC. fruits 蒴果，果梗长 2 mm～5 mm，稀较长或较短；果皮红褐色，单个分果瓣径 5.5 mm～7 mm，顶端有 短芒尖；部分裂开，可见内部种子 。 3.3 两面针种子 Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC. seeds 黑色、圆珠形，表面为一层光亮的黑色蜡质，去除后可见网状的骨质结构，质坚硬，腹面稍平坦， 横径 5 mm～6 mm，种胚白色圆形。 注：两面针的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为中间性种子。 3.4 种子超低温保存 seed of cryopreservation T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.10—2019 2 将经过前处理的两面针种子置于液氮（ -196 ℃）中保存 。 4 种子的采收及选择 4.1 种子采收 9 月～11 月间，当果皮颜色为红褐色时即可采收 ,去除果皮，取出种子。 4.2 种子选择 挑选发育饱满、均匀、健康的种子，置于 4 ℃ 冰箱中保存备用（存放时间不超过 3 个月）。 5 种子前处理 5.1 活力 5.1.1 检测 两面针种子活力以种子生活力为判别标准。 按照《植物生理学实验指导》中的溴麝香草酚蓝（ BTB） 法检测两面针种子生活力。 待测种子在 30 ℃～35 ℃ 温水中浸种 2 h， 随后取吸胀种子 20 粒， 整齐地埋于备好的 1.5％ BTB 琼脂凝胶 中，注意要将胚埋入凝胶中。将培养皿置于 35 ℃ 温箱中 5 h 后观察结果。 BTB 的配制和保存方法见附录 A。 5.1.2 鉴定及要求 在光下用放大镜对染色结果进行观察鉴定。凡种胚周围出现黄色晕圈的种子为有活力的种子，否 则为无活力的种子。 待保存的两面针种子生活力应 ≥70％。 5.1.3 计算 生活力按照公式（ 1）进行计算： 式中： A——生活力； y——有活力的种子数； x——总的种子数。 5.2 含水量范围 用尼龙网袋包裹两面针种