ICS 67.120.30 B51 DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB35/ 1171—2011 斜带石斑鱼种质标准 The germplasm of Epinephelus coioides 2011 - 07 - 01 发布 福建省质量技术监督局 2011 - 10 - 01 实施 发 布 DB35/ 1171—2011 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的起草规则编写。 本标准为强制性标准。 本标准由福建省海洋与渔业厅提出并归口。 本标准起草单位：厦门大学海洋与环境学院、漳州市水产技术推广站。 本标准主要起草人：丁少雄、尤颖哲、王军、王颖汇、杜佳莹、陈晓峰。 I DB35/ 1171—2011 斜带石斑鱼种质标准 1 范围 本标准规定了斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）的学名与分类、生长与繁殖特性、形态特征鉴 定标准、遗传学特性及所遵循的检测方法、检测规则与结果判别标准。 本标准适用于斜带石斑鱼的种质检测与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18654.3-2008 养殖鱼类种质检验 第3部分 性状测定 GB/T 18654.4-2008 养殖鱼类种质检验 第4部分 年龄与生长的测定 GB/T 18654.6-2008 养殖鱼类种质检验 第6部分 繁殖性能的测定 GB/T 18654.12-2008 养殖鱼类种质检验 第12部分 染色体组型分析 GB/T 18654.13-2008 养殖鱼类种质检验 第13部分 同工酶电泳分析 GB/T 18654.14-2008 养殖鱼类种质检验 第14部分 DNA含量的测定 GB/T 18654.15-2008 养殖鱼类种质检验 第15部分 RAPD分析 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 性反转 有功能的雌性斜带石斑鱼个体转变成有功能的雄性性别个体的现象。 4 4.1 名称与分类 名称 学名：斜带石斑鱼 Epinephelus coioides 4.2 分类 辐鳍亚纲（Actinopterygii），鲈形目（Perciformes），鲈亚目（Percoidei），鮨科(Serranidae)， 石斑鱼亚科(Epinephelinae)，石斑鱼属(Epinephelus)。 5 分布与生态习性 1 DB35/ 1171—2011 斜带石斑鱼主要分布在热带、 亚热带的印度-西太平洋沿岸海域，栖息于海水的中上层，底质类型 为岩礁及河口泥沙。 其耐受温度为16℃～39℃，适温范围为23℃～33℃，盐度范围在5～35之间。肉食性鱼类。 6 形态特征 6.1 外部形态 体延长，头背部斜直，眶间区微突；眼小，短于吻长；口大，上下颌前端具小犬齿或无，两侧齿细 尖，下颌齿2列～3列；鳃耙数随着个体成长而逐渐减少；前鳃盖骨后缘具锯齿，下缘光滑；鳃盖骨后缘 具3扁棘；体被细小栉鳞；背鳍鳍棘部与软条部相连，无缺刻；末端延伸不及肛门；胸鳍、尾鳍圆形。 头部及背部棕褐色，腹部淡白；头部、体侧及奇鳍散布许多不大于瞳孔的橙红色或红褐色小点，斑 点随生长而相对变小；体侧另具5条不显著、不规则、斜行并在腹侧分叉的暗横带，第一条横带位于背 鳍硬棘部分的前方，最后一条横带在尾柄上。 斜带石斑鱼的外部形态见图1。 图1 6.2 可数性状 6.2.1 背鳍鳍式 D. Ⅺ-14～16。 6.2.2 臀鳍鳍式 A. Ⅲ-7～8。 6.2.3 胸鳍 P. 19～21。 6.2.4 腹鳍 V. I-5。 6.2.5 2 尾鳍条数 斜带石斑鱼外形 DB35/ 1171—2011 C. 21。 6.2.6 侧线鳞数 58～65。 6.2.7 第一鳃弓外侧鳃耙数 8～10+14～17。 6.3 可量性状 体长为体高的2.9倍～3.7倍；体高为体宽的1.4倍～2.0倍；体长为头长的2.3倍～2.6倍；头长为眼 径的5.0倍～6.2倍；上颌长为吻长的1.8倍～1.9倍，为眼径的2.1倍～3.2倍。 6.4 内部构造特征 6.4.1 鳔 鳔无鳔管，1室。 6.4.2 幽门盲囊数 自基部计算约40个～50个，其中4个～10个具有分支。 6.4.3 脊椎骨总数 23枚～24枚，其中躯椎10枚～11枚，尾椎13枚。 6.4.4 腹膜 腹膜为黄褐色。 7 生长与繁殖 7.1 生长 7.1.1 生长方程式 斜带石斑鱼的体长、体重的生长方程式分别见式（1）和式（2） L=65.255[1-e-0.420(t+0.547)] W=6017.24[1-e-0.420(t+0.547)]3.342 式中： L——体长，单位为厘米（cm）； W——体重，单位为克（g）； t ——年龄，单位为龄（龄）。 7.1.2 ......... (1) .................. (2) 不同年龄斜带石斑鱼体长体重实测值 不同年龄斜带石斑鱼体长、体重实测值见表1。 3 DB35/ 1171—2011 表1 不同年龄组斜带石斑鱼个体体长、体重实测值 年龄（龄） 1龄 2龄 3龄 4龄 5龄 体长，cm 31.1 43.1 50.2 55.7 58.9 体重，g 521.9 1527.2 2632.5 3254.1 4433.7 7.1.3 体长与体重关系式 斜带石斑鱼体长与体重的关系式见式（3）： W=0.006L3.318 式中： W——体重，单位为克（g）； L——体长，单位为厘米（cm）。 7.2 .................... (3) 繁殖特性 7.2.1 性成熟年龄 斜带石斑鱼雌鱼3龄以上开始性成熟；5龄以上雌鱼开始具有性反转能力。 7.2.2 怀卵量 85万粒/尾～300万粒/尾。 7.2.3 产卵期 主要产卵期3月到8月，产卵水温25℃～30℃，分批产卵。 7.2.4 受精卵特征 卵径0.78+0.16mm，浮性卵。 7.2.5 胚胎发育过程 在水温25℃下，胚胎发育过程大约持续28小时左右，主要分为卵裂期（见资料性附录A.1图a:2-10）、 囊胚期（见资料性附录A.1图a:11-12）、原肠胚期（见资料性附录A.1图a:13-15；资料性图b:1）、神 经胚期（见附录A.1图b:2-4）、器官形成期（见附录A.1图b:5-15）等5个阶段。 7.2.6 初孵仔鱼特征 初孵仔鱼全长1.3mm～2.4mm，在水温25℃下，孵出后54小时左右开始开口摄食。 （见资料性附录A.2） 8 遗传学特性 8.1 8.1.1 8.1.2 4 细胞遗传学特性 染色体数：2n=48 核型公式：2n=2sm+46t；NF=50。 DB35/ 1171—2011 中期分裂相及组型见图2。 (a为 中期分裂相；b为组型图) 图2 8.2 中期分裂相及组型图 生化遗传特征 8.2.1 肌肉组织同工酶谱型 斜带石斑鱼肌肉组织6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)的谱型见图3。 图3 8.2.2 斜带石斑鱼肌肉组织 G6PDH 电泳图谱 群体遗传特性 采用水平凝胶电泳技术，对台湾海峡的斜带石斑鱼45个个体进行了同工酶分析，斜带石斑鱼群体的 多态位点百分率P为18.5%，有效等位基因平均数Ne为1.185，平均杂合度的观测值Ho为0.0469，预期值 He为0.0622。 8.3 分子遗传学特征 8.3.1 斜带石斑鱼 DNA 含量 2C=2.50±0.09 pg 8.3.2 随机扩增多态性 DNA（RAPD） 5 DB35/ 1171—2011 8.3.2.1 斜带石斑鱼 RAPD 图谱 斜带石斑鱼RAPD图谱见图4。 （随机引物519，序列为：CCTCCTCATC） 图4 8.3.2.2 斜带石斑鱼 RAPD 图谱 群体遗传特性 台湾群体内个体间的遗传相似系数F在0.6010～0.8150之间，平均遗传相似系数F为0.7152。（所使 用的随机引物及扩增结果见资料性附录B） 8.3.2.3 斜带石斑鱼与点带石斑鱼的 RAPD 鉴别 斜带石斑鱼与点带石斑鱼的RAPD鉴别图谱如图5所示，斜带石斑鱼特异性RAPD标记如图中箭号所示， 大小为780bp的DNA片段。 （随机引物1038，序列为：TCGCGGAACC，M为分子量marker DL2000，1～5为点带石斑鱼，6～10为斜带 石斑鱼） 图5 8.3.3 斜带石斑鱼与点带石斑鱼的 RAPD 鉴别图谱 斜带石斑鱼 DNA 条形码 斜带石斑鱼条形码靶基因为ND2基因，全序列共809个碱基，斜带石斑鱼种内的序列歧异度 D ≤ 1.0%，与种间的同源序列差异极显著（p<0.01）。斜带石斑鱼DNA条形码序列见图6。 6 DB35/ 1171—2011 图6 9 斜带石斑鱼 DNA 条形码序列图 检验方法 9.1 性状检测 按GB/T 18654.3-2008执行。 9.2 生长与繁殖测定 按GB/T 18654.4-2008执行，按GB/T 18654.6-2008执行。 9.3 染色体的检测标准 按GB/T 18654.12-2008执行。 9.4 同工酶检测标准 9.4.1 样品制备、电泳分析 样品制备、电泳分析按GB/T 18654.13-2008执行。 9.4.2 结果计算 多态位点比例(P)、平均杂合度观察值(Ho)、平均杂合度期望值(He)、平均有效等位基因数（Ne）分 别按式(4) ～（7）计算： P = N1 / n ......... (4) 式中： P ——多态位点比例； N1——多态位点数； n——检测位点总数。 7 DB35/ 1171—2011 Ho=(∑H1) / n ................... (5) 式中： Ho ——平均杂合度观察值； H1 ——多态位点杂合度观察值； n——检测位点总数。 2 He=(∑1 - pi ) / n ................ (6) 式中： He ——平均杂合度期望值； pi ——某基因位点的基因频率； n——检测位点总数。 9.5 DNA 含量的测定标准 按GB/T 18654.14-2008执行。 9.6 RAPD 检测标准 9.6.1 DNA 的提取、PCR 扩增 DNA的提取、PCR扩增按GB/T 1865