ICS 65.150 B 52 备案号:XXX 北 DB11 京 市 地 方 标 准 DB11/T 1220—2015 西伯利亚鲟全人工繁殖技术规范 Specifications of artificial propagation techniques on Siberian sturgeon （Acipenser baerii） 2015-07 - 08 发布 北京市质量技术监督局 2015 -11 - 01 实施 发 布 DB11/T 1220—2015 目 次 前言................................................................................. II 1 范围................................................................................ 1 2 规范性引用文件...................................................................... 1 3 术语和定义.......................................................................... 1 4 亲鱼培育............................................................................ 1 5 亲鱼挑选............................................................................ 1 6 人工催产............................................................................ 2 7 精液采集与保存...................................................................... 2 8 鱼卵采集............................................................................ 3 9 人工授精............................................................................ 3 10 脱粘............................................................................... 3 11 孵化............................................................................... 3 12 出苗............................................................................... 4 附 录 A （资料性附录） .............................................................. 5 参考文献.............................................................................. 6 I DB11/T 1220—2015 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由北京市农业局提出并归口。 本标准由北京市农业局组织实施。 本标准起草单位：北京市水产科学研究所。 本标准主要起草人：胡红霞、朱华、董颖、姚志刚、李立成、郭洪胜。 II DB11/T 1220—2015 西伯利亚鲟全人工繁殖技术规范 1 范围 本标准规定了西伯利亚鲟（Acipenser baerii）全人工繁殖时的亲鱼培育及挑选、人工催产、精液 采集与保存、鱼卵采集、人工授精、脱粘、孵化和出苗的技术要求。 本标准适用于西伯利亚鲟的全人工繁殖。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB11/T 193—2003 鲟鱼养殖技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 全人工繁殖 artificial propagation 在人工养殖条件下从苗种培育到性腺发育成熟的亲鱼使用外源性激素催产等技术进行人工繁殖。 3.2 极化指数 polarization index 鱼卵动物极到卵核的距离与动物极到植物极的距离之比。 4 亲鱼培育 4.1 人工培育 人工繁育的苗种或性腺发育在II期之前的野生鱼种,在水泥池、池塘或工厂化车间等人工养殖条件 下，按照DB11/T 193—2003的要求，培育成为性腺发育达到IV期，能够人工催产的亲鱼。性腺分期方法 见附录A。 4.2 亲鱼性成熟年龄 雌鱼性成熟年龄6～8龄，雄鱼4～5龄。 5 亲鱼挑选 5.1 雌鱼选择 1 DB11/T 1220—2015 用挖卵器从雌鱼体内取出卵子，目测卵呈灰黑色，用卡尺量长卵径大于2.6mm。将卵子放入水中煮2 min～3 min，晾凉后用刀片沿卵的长轴切开，计算极化指数。挑选鱼卵极化指数小于1/20的雌鱼用于催 产。极化指数计算方法见公式（1）。 式中： PI——极化指数； l1 ——鱼卵动物极到卵核的最短距离； l2 ——鱼卵动物极到植物极的距离。 5.2 雄鱼选择 穿刺取性腺，目测性腺呈白色或乳白色，显微镜压片检测可见到精子。 6 人工催产 6.1 药物种类 人工催产药物可选用促黄体素释放激素类似物（LHRH-A）单独使用,或者和地欧酮（DOM）混合使用。 6.2 注射剂量 雌鱼：每千克鱼体重LHRH-A用量为30μg～100μg；每千克鱼体重混合DOM用量为1mg～2mg。 雄鱼：每千克鱼体重LHRH-A用量为20μg～50μg。 6.3 注射次数 雌鱼一般为两次注射，第一次注射10%的剂量，10h～15h后注射90%的剂量；雄鱼一次注射，在雌鱼 第二次注射前2h～6h注射。 6.4 注射方法 可采取背鳍基部下方肌肉注射和胸鳍基部注射两种方法，注射操作完成后拔针头时应用手指轻轻按 摩注射处,使药物尽量不外流。 7 精液采集与保存 7.1 采集时间 注射催产药物10h左右开始检查雄鱼，轻压雄鱼腹部时发现乳白色精液流出，即可开始采集精液， 初次采集后每隔5h左右检查并采集1次，一般可以采集3～4次。 7.2 采集方法 导管吸出法：将医用导管与医用注射器前端相连，用干燥毛巾将生殖孔周围体表擦干；轻压腹部有 少量精液排出时，将导管深入雄鱼生殖孔内，用注射器抽取精液。宜使用内径3mm、长度5cm的医用导管 和100ml的医用注射器。使用工具均需消毒。 2 DB11/T 1220—2015 7.3 精液保存 将取出的精液移入干燥烧杯中，封口后放入冰箱0℃～4℃保存。采出后和使用前的精液均应用显微 镜进行精子活力检测。 8 鱼卵采集 8.1 挤压法 用干燥毛巾擦干生殖孔周围，挤压腹部两侧，将鱼卵挤入干燥容器内。挤压法采卵需间隔1h～2h 多次采集，直到挤压腹部无鱼卵排出为止。 8.2 手术法 使用100 mg/L的间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）或50 mg/L的丁香酚溶液麻醉雌鱼，然后固 定在操作台上，用75%酒精消毒腹部，用手术刀在距生殖孔前方10cm左右的腹部切一个3cm～5cm切口， 从鱼体腹部两侧由头部向尾部反复挤压，将鱼卵从切口处挤出；或用不锈钢匙从切口伸入腹腔取出鱼卵， 放在干燥容器内。鱼卵全部取出后，用聚丙烯丝线缝合切口，并对缝合部位用碘酒消毒。 所有使用工具均应消毒。 9 人工授精 9.1 精液用量 根据精液浓度及精子活力确定使用精液体积，每公斤鱼卵使用10ml～20ml精液。 9.2 人工授精方法 根据鱼卵总量，计算需要的精液量。用养殖池水快速稀释精液50～100倍后倒在鱼卵上，用羽毛搅 动3min～5min进行人工授精。授精时宜选择活力强的精液混合使用。 10 脱粘 使用医用滑石粉配成20%～30%的水溶液，将受精卵倒入含有该溶液的容器内，用手工或脱粘装置搅 动40min～60min。每公斤受精卵使用10L～15L滑石粉溶液。为防止缺氧，宜搅动20min～30min后，更换 一次滑石粉溶液。 11 孵化 11.1 孵化装置 可选用尤先科筛网式孵化器或麦克唐纳瓶式孵化器。 11.2 孵化条件 11.2.1 温度 保持水温13℃～16℃。 3 DB11/T 1220—2015 11.2.2 溶氧 不小于6mg/L。 11.2.3 光照 避免阳光直射。 11.2.4 孵化用水 经过不大于150目的筛绢过滤，避免将敌害生物带入。 11.3 孵化期日常管理 11.3.1 水霉控制 应及时拣出死卵。 在孵化初期，每日用5mg/L的亚甲基兰浸泡鱼卵15min；在接近鱼卵破膜时停止浸泡。 11.3.2 受精率统计 在鱼卵发育到原肠中后期时开始统计受精率。 12 出苗 水温13℃～16℃，受精卵孵化6d±1d开始出苗；温度越低，出苗时间越长。 尤先科筛网式孵化器鱼苗孵出后留在方槽内，及时捞出孵出仔鱼，放入鱼苗培育池；麦克唐纳瓶式 孵化器在开始出苗时架设水槽，使孵出鱼苗直接流入集鱼箱或鱼苗培育池。 4 DB11/T 1220—2015 附 录 A （资料性附录） 西伯利亚鲟雌性性腺发育分期方法 A.1 性腺I期 性腺外观呈透明带状，肉眼看不见卵粒，辨认不出卵巢与精巢。切片可见到正在分裂的卵原细胞簇 及直径40μm～100μm的卵母细胞，卵母细胞具有较大的细胞核，占整个细胞大小的一半以上，细胞核 内只见核质还没有核仁出现。 A.2 性腺II期 Ⅱ期卵巢呈淡黄色被脂肪覆盖，在切片中观察初级卵母细胞在数量上和面积上占优势。此期卵母细 胞体积较卵原细胞大，直径约100μm～500μm，细胞质增多，细胞核明显，核膜内壁有1圈核仁分布。 Ⅱ期后期卵母细胞的核仁数显著增加，大小不等，排列在核膜内缘。 A.3 性腺III期 卵巢中卵粒呈灰色，切片可观察到卵细胞近似椭圆形，外包滤泡细胞，核仁变小数目增多，并且密 集排列在核膜内侧。细胞质内含有较多的卵黄颗粒，分布于细胞质的大部分区域。在滤泡细胞膜和核膜 之间出现一环状的脂肪滴，此期细胞核在中央没有发生极化。 A.4 性腺IV期 IV