ICS 65.020.30 B 44 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2288—2015 鹿茸中磷脂含量的测定 分光光度法 Determination of phospholipid in cornu cervi pantotrichum—Spectrophotometry 2015 - 04 - 07 发布 吉林省质量技术监督局 2015 - 05 - 01 实施 发 布 DB22/T 2288—2015 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省食品药品监督管理局提出 本标准由吉林省畜牧业管理局归口。 本标准起草单位：吉林省药品检验所。 本标准主要起草人：杨献玲、李秀芬、申玉华、彭振宇、杨继芳。 I DB22/T 2288—2015 鹿茸中磷脂含量的测定 分光光度法 1 范围 本标准规定了鹿茸中磷脂含量的分光光度测定方法。 本标准适用于梅花鹿和马鹿鹿茸中磷脂含量的测定。 本标准最低检出限为：0.3 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试料经用无水乙醇提取，磷脂与硫氰铁铵反应生成溶于三氯甲烷的红色的配位化合物，在485 nm 波 长处有最大吸收，通过测定该配位化合物的吸光度可测定磷脂的含量。 4 试剂和材料 除非另有注明，本标准所用试剂均为分析纯试剂，水为 符合GB/T 6682规定的三级水。 4.1 三氯甲烷（CHCl3）。 4.2 无水乙醇（CH3CH2OH）。 4.3 三氯化铁（FeCl3）。 4.4 硫氰酸铵（NH4SCN）。 4.5 卵磷脂标准品：纯度大于 99.0%，CAS 8002-43-5。 4.6 硫氰酸铁铵溶液：取三氯化铁（4.3） 2.70 g、硫氰酸铵（4.4）2.30 g，置于 100 mL 量瓶中， 加水溶解并稀释至刻度，摇匀。 4.7 卵磷脂标准储备液：准确称取卵磷脂标准品（4.5）约 75 mg（准确至 0.1 mg），置于 100 mL 容 量瓶中，用三氯甲烷（4.1）溶解并定容至刻度，于 4 °C 冰箱中保存。此标准储备液溶液每 1 mL 含卵 磷脂 750 μg。 4.8 卵磷脂标准工作液：准确量取卵磷脂标准储备液（4.7）10 mL，置于 100 mL 容量瓶中，用三氯甲 烷（4.1）定容至刻度，于 4 °C 冰箱中保存。此标准工作液每 1 mL 含卵磷脂 150 μg。 5 5.1 5.2 仪器 可见分光光度计 。 分析天平：感量±0.0001 g、感量± 0.001 g、感量±0.01 g 。 1 DB22/T 2288—2015 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 6 超声波清洗器：功率：700 w、频率：40 kHz。 旋转蒸发仪。 漩涡混合器。 离心机：转速≥2000 rpm。 粉碎机：功率：800 w、 转速：26000 rpm。 试样的制备 6.1 取样及粉碎 根据不同规格鹿茸，在不同部位（上段、中段、下段）均匀等重取样，鹿茸样品初步粉碎（通过一 号标准筛），再用四分法缩减分取约25g样品，粉碎并过四号标准筛，筛上部分样品量≤0.5 g，将筛上 和筛下部分充分混匀后装入磨口瓶中备用。 茸片：用四分法缩减分取约25g样品，粉碎并过四号标准筛，筛上部分样品量≤0.5 g，将筛上和筛 下部分充分混匀后装入磨口瓶中备用。 茸粉：直接过四号筛，筛上部分样品量≤0.5 g，如果筛上部分样品≥0.5 g，继续粉碎，直到符合 要求，将筛上和筛下部分充分混匀后装入磨口瓶中备用。 6.2 试样溶液的制备 准确称取试样（6.1）约1.5 g（精确至0.01 g），置于250 mL具塞锥形瓶中，加入乙醇50 mL，准 确称定重量，超声处理1 h，放至室温，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，收集全部滤液，取 滤液25 mL，低温减压浓缩至干，准确加入10.0 mL三氯甲烷（4.1）充分溶解残渣，摇匀，过滤，滤液 即为试样溶液（于4 °C冰箱中保存）。 7 分析步骤 7.1 标准曲线 准确吸取标准工作溶液（4.8）0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL，分别置于10 mL 具塞刻度试管中，加三氯甲烷（4.1）至5.0 mL刻度，加硫氰酸铁铵溶液（4.6）2.0 mL，置漩涡混合器 混匀1 min，离心（5.6）10 min，取下层溶液，在485 nm波长处测定吸光度，同时以零号管作为空白， 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 7.2 试料的测定 准确吸取试样溶液（6.2）1.0 mL，置与10mL具塞刻度试管中，加三氯甲烷至5.0 mL刻度，参照（7.1） 项下自“硫氰酸铁铵溶液（4.6）2.0 mL”起，依法操作，测定吸光度，根据标准曲线计算出试料溶液 中的磷脂浓度。 8 结果计算 8.1 2 试样中磷脂含量按公式进行计算。 DB22/T 2288—2015 X = C × V × 1000 .................................... (1) m × 1000 式中： X ——试样中磷脂的含量（以卵磷脂计），单位为毫克每千克（mg/kg）； C ——测定试样溶液中磷脂的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V ——稀释倍数，单位为毫升（mL）； m ——试样质量，单位为克（g）。 8.2 以重复性条件下获得的两次独立测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 9 精密度 9.1 重复性 在重复性条件下，获得的两次平行独立测定结果＞10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过5 %；获得的 两次平行独立测定结果≤10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过10 %。 9.2 再现性 在再现性条件下，获得的两次平行独立测定结果＞10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过10%；获得的 两次平行独立测定结果≤10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过20%。 _________________________________ 3