ICS 11.120.20 C 30 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5127.11—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中 有毒有害物质的测定 第 11 部分：戊二醛迁 移量 高效液相色谱法 2019 - 12 - 27 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 01 - 28 实施 发 布 DB13/T 5127.11—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5127《植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定》共分16个部分： ——第1部分：柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钾迁移量 原子吸收分光光度法； ——第2部分：二巯基丙醇迁移量 碘量法； ——第3部分：葡萄糖迁移量 碘量法； ——第4部分：柠檬酸迁移量 酸碱中和滴定法； ——第5部分：硫氰酸胍迁移量 分光光度法； ——第6部分：丙酮迁移量 气相色谱法； ——第7部分：丙交酯迁移量 气相色谱法； ——第8部分：对苯二甲酸迁移量 高效液相色谱法； ——第9部分：乙醇迁移量 气相色谱法； ——第10部分：环氧乙烷迁移量 气相色谱法； ——第11部分：戊二醛迁移量 高效液相色谱法； ——第12部分：异氰酸酯迁移量 高效液相色谱法； ——第13部分：甲醛迁移量 气相色谱质谱联用法； ——第14部分：蛋白质迁移量 可见-紫外分光光度法； ——第15部分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡迁移量 电感耦合等离子体质谱法； ——第16部分：生物负载 薄膜过滤法。 本部分为DB13/T 5127的第11部分。 本部分由河北省药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院。 本部分主要起草人：王丽、刘若锦、李挥、刘华、杨光。 I DB13/T 5127.11—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中 有毒有害物质的测定 第 11 部分：戊二醛迁移量 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了植入性医疗器械高分子材料浸提液中戊二醛迁移量的高效液相色谱法的测定方法。 本标准适用于植入性医疗器械高分子材料浸提液中戊二醛迁移量的测定。 本方法对戊二醛的检出限为0.3 mg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 16886.12 医疗器械生物学评价 第12部分：样品制备与参照材料 3 方法原理 样品浸提液中的戊二醛经过衍生化后通过高效液相色谱柱进行分离，采用紫外检测器进行检测。 采用外标法定量。 4 试剂与材料 除另有规定，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 生理盐水：0.9 %。 4.2 戊二醛溶液：25 %。 4.3 乙腈，色谱纯。 4.4 2,4-二硝基苯肼：分析纯。 4.5 高氯酸：优级纯。 4.6 亚硫酸钠：分析纯。 4.7 硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）。 5 试剂配制 5.1 戊二醛溶液标定 1 DB13/T 5127.11—2019 5.1.1 精密移取戊二醛溶液（4.2）5.0 mL 于 100 mL 容量瓶中，加水稀释并定容至刻线，摇匀，待 用。 5.1.2 精密移取戊二醛溶液（4.3.1）1.0 mL，准确加入 2%亚硫酸钠溶液 5.0 mL,室温放置 10 min, 用碘标准溶液滴定。临近终点时加入 5 滴 1%淀粉溶液，继续滴定至溶液无色。平行试验 2 份。同法滴 定空白溶液。 5.2 戊二醛储备液（100 μ g/mL）:精密移取 25 %戊二醛溶液 40 μ L 于 100 mL 容量瓶中，加水稀释 并定容至刻线，摇匀。 5.3 戊二醛标准溶液（10 μ g/mL）:精密移取 100 μ g/mL 戊二醛储备液 10 mL 于 100 mL 容量瓶中， 加水稀释并定容至刻线，摇匀。 5.4 2,4-二硝基苯肼溶液：称取 2,4-二硝基苯肼 2.4 g,加 30 %高氯酸溶液，溶解成 100 mL。 5.5 亚硫酸钠溶液（2 %）：称取 2.0 g 亚硫酸钠（4.7），用水溶解并定容至 100 mL 容量瓶中。 5.6 淀粉指示液：取可溶性淀粉 0.5 g,加水 50 mL 搅匀后，缓缓倾入 100 mL 沸水中，随加随搅拌， 继续煮沸 2 min，放冷，倾取上层清液，即得。本液应临用新制。 5.7 碘滴定液（0.05 mol/L）配制:取碘 13.0 g,加碘化钾 36 g 与水 50 mL 溶解后，加盐酸 3 滴与水 适量使成 1000 mL，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。 5.8 碘滴定液（0.05 mol/L）标定：精密量取本液 25 mL,置碘瓶中，加水 100 mL 与盐酸溶液（9→100） 1 mL,轻摇混匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）滴定至近终点时，加淀粉指示液 2 mL，继续滴定 至蓝色消失。根据硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）的消耗量，算出本液的浓度。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 6.2 电子天平，精度 0.1 mg。 6.3 色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶填充剂色谱柱。 6.4 0.45 μ m 滤膜。 7 试液制备 7.1 浸提试验 7.1.1 浸提溶液 本标准采用模拟浸提方式，以生理盐水为浸提介质。 7.1.2 浸提条件和方法 7.1.2.1 浸提条件建立在通常可行并经论证为一个标准化方法的基础之上，在多数情况下为产品使用 的适当加严的条件。应在下列之一的条件下进行浸提： a) (37±1)℃,(24±2) h； 2 DB13/T 5127.11—2019 (37±1)℃,(72±2)h； c) (50±2)℃,(72±2) h； d) (70±2)℃,(24±2) h； e) (121±2)℃,(1±0.1)h。 7.1.2.2 可用标准表面积确定所需的浸提介质的体积。标准表面积包括样品两面面积的总和，不包括 不确定和不规则面积。当由于样品外形不能确定其表面积时，应使用质量/浸提液体积。见表1。 b) 表1 标准表面积和浸提液体积 厚度 浸提比例 （mm） （表面积或质量/体积）±10% 膜、薄片、管壁 ＜0.5 6 cm / mL 管壁、厚板、小型模制件 0.5～1.0 3 cm / mL 大型模制件 ＞1.0 3 cm / mL 弹性密封件 ＞1.0 1.25 cm / mL 粉剂、球体、泡沫材料、无吸收性模制件 不规则形状固体器械 0.2 g/ mL 薄膜、织物 不规则形状多孔器械（低密度材料） 0.1 g/ mL 材料形态举例 2 2 2 2 注1：现在尚无测试吸收剂和水胶体的标准化方法，推荐以下方案： 2 注2：测定材料浸提介质吸收量（每0.1 g或1.0cm 材料所吸收的量）； 2 注3：在进行浸提时，对浸提混合物按每0.1 g或1.0 cm 额外加入该浸提介质吸收量。 7.1.2.3 对于弹性体、涂层材料、复合材料、多层材料等，由于完整表面与切割表面存在潜在的浸提 性能差异，因此应尽量完整地进行浸提。 7.2 标准工作液制备 分别移取0、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0 mL浓度为10 μg/mL戊二醛标准溶液于7个试管中， 各加水至1.0 mL,精密加流动相1 mL与2,4-二硝基苯肼溶液0.1 mL,立即于混合器上混匀，用0.45 μm 膜过滤。戊二醛的标准工作液浓度分别为：0.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、5.0 mg/L、6.0 mg/L、 8.0 mg/L、10.0 mg/L。 7.3 空白液制备 以同批浸提介质作为空白试验液。 8 测定 8.1 仪器参考条件 根据所用仪器型号选择最佳测定条件。 参考条件：流动相：70 %乙腈：30 %水（V:V）和0.02 mol/L磷酸二氢钾（pH3.5）；流速：1.2 mL/min； 进样量：10 μL；检测波长：360 nm；柱温：室温。 8.2 样品测定 3 DB13/T 5127.11—2019 准确量取浸提试验中得到的生理盐水溶液适量以每分钟3000转离心10 min，精密量取上清液1 mL， 精密加流动相1 mL与2,4-二硝基苯肼溶液0.1 mL,立即于混合器上混匀，用0.45 μm膜过滤后供高效液 相色谱进样。平行制样两份。 按照上述所列测定条件，对处理后的标准工作溶液和浸提液进行测定。以标准工作溶液中戊二醛 浓度为横坐标，以戊二醛衍生物的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程。 浸提液中戊二醛参考色谱图见附录A。 9 结果计算 浸提液中戊二醛的含量按公式（1）计算。 ………………………………………………（1） 式中： C ——浸提液中戊二醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； y ——浸提液中戊二醛衍生物峰面积之和； a ——回归曲线的斜率； b ——回归曲线的截距； ρ ——稀释倍数。 样品中对戊二醛的特定迁移量按公式（2）计算。 M  C A  1000 …………………………………………（2） 式中： 2 M ——特定迁移量，mg/cm 或 mg/g； 2 A ——浸提比例，cm / mL或g/mL。 计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。 10 精密度 浸提液中目标物在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4 DB13/T 5127.11—2019 附 录 A (资料性附录) 浸提液中戊二醛参考色谱图 浸提液中戊二醛参考色谱图见图A.1。 说明： 1--衍生化试剂； 2--衍生物1； 3--衍生物2。 图A.1 浸提液中戊二醛参考色谱图 _________________________________ 5