ICS 11.120.20 C 30 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5127.8—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液 中有毒有害物质的测定 第 8 部分：对苯 二甲酸迁移量 高效液相色谱法 2019 - 12 - 27 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 01 - 28 实施 发 布 DB13/T 5127.8—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5127《植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定》共分16个部分： ——第1部分：柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钾迁移量 原子吸收分光光度法； ——第2部分：二巯基丙醇迁移量 碘量法； ——第3部分：葡萄糖迁移量 碘量法； ——第4部分：柠檬酸迁移量 酸碱中和滴定法； ——第5部分：硫氰酸胍迁移量 分光光度法； ——第6部分：丙酮迁移量 气相色谱法； ——第7部分：丙交酯迁移量 气相色谱法； ——第8部分：对苯二甲酸迁移量 高效液相色谱法； ——第9部分：乙醇迁移量 气相色谱法； ——第10部分：环氧乙烷迁移量 气相色谱法； ——第11部分：戊二醛迁移量 高效液相色谱法； ——第12部分：异氰酸酯迁移量 高效液相色谱法； ——第13部分：甲醛迁移量 气相色谱质谱联用法； ——第14部分：蛋白质迁移量 可见-紫外分光光度法； ——第15部分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡迁移量 电感耦合等离子体质谱法； ——第16部分：生物负载 薄膜过滤法。 本部分为DB13/T 5127的第8部分。 本部分由河北省药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院。 本部分主要起草人：刘若锦、邵文亮、王丽、王志永、刘华、杨光、冯香萍、周丽。 I DB13/T 5127.8—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定 第 8 部分：对苯二甲酸迁移量 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了植入性医疗器械高分子材料浸提液中对苯二甲酸迁移量的高效液相色谱法的测定方 法。 本标准适用于植入性医疗器械高分子材料浸提液中对苯二甲酸迁移量的测定。 本方法对苯二甲酸的检出限为0.5 mg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 16886.12 医疗器械生物学评价 第12部分：样品制备与参照材料 3 方法原理 浸提液中的对苯二酸通过高效液相色谱柱进行分离，采用紫外检测器进行检测。甲醇浸提液直接 进样。采用外标法定量。 4 试剂与材料 除另有规定，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 对苯二甲酸标准品：纯度大于 99 %。 4.2 邻苯二甲酸标准品：纯度大于 99 %。 4.3 甲醇：分析纯。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2 电子天平，精度 0.1 mg。 5.3 色谱柱：ODS 250 mm×4.6 mm×5 μ m，或相当者。 5.4 0.45 μ m 滤膜。 1 DB13/T 5127.8—2019 6 试液制备 6.1 浸提试验 6.1.1 浸提溶液 本标准采用极限浸提方式，以甲醇为浸提介质。 6.1.2 浸提条件和方法 6.1.2.1 浸提条件建立在通常可行并经论证为一个标准化方法的基础之上，在多数情况下为产品使用 的适当加严的条件。应在下列之一的条件下进行浸提： a) (37±1)℃,(24±2) h； b) (37±1)℃,(72±2)h； c) (50±2)℃,(72±2) h； d) (70±2)℃,(24±2) h； e) (121±2)℃,(1±0.1)h。 6.1.2.2 可用标准表面积确定所需的浸提介质的体积。标准表面积包括样品两面面积的总和，不包括 不确定和不规则面积。当由于样品外形不能确定其表面积时，应使用质量/浸提液体积。见表1。 表1 标准表面积和浸提液体积 厚度 浸提比例 （mm） （表面积或质量/体积）±10% 膜、薄片、管壁 ＜0.5 6 cm / mL 管壁、厚板、小型模制件 0.5～1.0 3 cm / mL 大型模制件 ＞1.0 3 cm / mL 弹性密封件 ＞1.0 1.25 cm / mL 粉剂、球体、泡沫材料、无吸收性模制件 不规则形状固体器械 0.2 g/ mL 薄膜、织物 不规则形状多孔器械（低密度材料） 0.1 g/ mL 材料形态举例 2 2 2 2 注1：现在尚无测试吸收剂和水胶体的标准化方法，推荐以下方案： 2 注2：测定材料浸提介质吸收量（每0.1 g或1.0cm 材料所吸收的量）； 2 注3：在进行浸提时，对浸提混合物按每0.1 g或1.0 cm 额外加入该浸提介质吸收量。 6.1.2.3 对于弹性体、涂层材料、复合材料、多层材料等，由于完整表面与切割表面存在潜在的浸提 性能差异，因此应尽量完整地进行浸提。 6.2 标准工作液制备 对苯二甲酸标准储备溶液（500 mg/L）：准确称取50 mg（精确至0.1 mg）对苯二甲酸标准品，加 入90 mL甲醇使其溶解，将溶液加热至50℃，持续1 h，使对苯二甲酸充分溶解。待溶液冷却后转移至 100 mL容量瓶，用甲醇定容。 邻苯二甲酸内标储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取0.1 g（精确至0.1 mg）邻苯二甲酸标准品， 用10 mL甲醇溶解，然后将溶液转移至100 mL容量瓶中并以异丙醇定容。 对苯二甲酸标准中间溶液：分别于6只25 mL容量瓶中加入0 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL、 20.0 mL对苯二甲酸标准储备溶液，再分别加入5 mL邻苯二甲酸内标储备溶液，用甲醇定容。对苯二甲 2 DB13/T 5127.8—2019 酸标准中间溶液的浓度分别为0.0 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L。内标 邻苯二甲酸的浓度均为200 mg/L。应当天配制。 邻苯二甲酸内标中间溶液：取5 mL邻苯二甲酸内标储备液于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为 200 mg/L。 6.3 空白液制备 以同批浸提介质作为空白试验液。 7 测定 7.1 仪器参考条件 根据所用仪器型号选择最佳测定条件。 参考条件：流动相：0.1 mol/L磷酸二氢铵，10%的乙腈，pH 4.3；流速：1.0 mL/min；进样量： 10 μL；检测波长：242 nm；柱温：室温。 7.2 标准曲线和样品测定 按照上述所列测定条件，对标准工作溶液和浸提液进行测定。以标准工作溶液中对苯二酸浓度为 横坐标，以对苯二酸的峰面积与邻苯二甲酸峰面积的比值为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方 程。 浸提液中对苯二甲酸参考色谱图见附录A。 8 结果计算 浸提液中对苯二甲酸的含量按公式（1）计算。 ………………………………………………（1） 式中： C ——浸提液中对苯二甲酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； y ——浸提液中苯二酸的峰面积与邻苯二甲酸峰面积的比值； a ——回归曲线的斜率； b ——回归曲线的截距； ρ ——稀释倍数。 样品中对苯二甲酸的特定迁移量按公式（2）计算。 M  C A  1000 …………………………………………（2） 式中： 2 M ——特定迁移量，mg/cm 或 mg/g； A ——浸提比例，cm2/ mL或g/mL。 计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。 3 DB13/T 5127.8—2019 9 确证试验 若对苯二甲酸的特定迁移量超过了限量要求，可采用离子交换色谱柱，将浸提液和标准溶液重新 进行高效液相色谱分析、验证。 色谱参考条件：离子交换色谱柱：三甲基铵交换剂，或相当者；流动相：溶解氯化铵10.7 g于500 mL水中，用5 %四硼酸二钠调pH值7.8～8.0，加水至1 L；流速：2 mL/min。 10 精密度 浸提液中目标物在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4 DB13/T 5127.8—2019 附 录 A （资料性附录） 浸提液中对苯二甲酸参考色谱图 浸提液中对苯二甲酸参考色谱图见图A.1。 说明： 1--邻苯二甲酸； 2--对苯二甲酸。 图A.1 浸提液中对苯二甲酸参考色谱图 _________________________________ 5