ICS 65.020 B 01 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 3078—2019 不同肥力耕地土壤微生物学指标 黑土 Microbiological index of cultivated soil in different fertility dregree - Black soil 2019 - 12 - 25 发布 吉林省市场监督管理厅 2020 - 02 - 01 实施 发 布 DB22/T 3078—2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由吉林省农业农村厅提出并归口。 本标准起草单位：吉林省农业科学院。 本标准主要起草人：吴海燕、范作伟、陈帅民、李阳阳、沙洪林、迟畅、彭畅。 I DB22/T 3078—2019 不同肥力耕地土壤微生物学指标 黑土 1 范围 本标准规定了黑土旱田不同肥力耕地土壤样品采集制备、化学肥力指标测定和微生物学肥力指标。 本标准适用于黑土旱田耕地土壤微生物学指标评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 32737 土壤硝态氮的测定 紫外分光光度 LY/T 1228 森林土壤氮的测定 NY/T 52 土壤水分测定法 NY/T 87 土壤全钾测定法 NY/T 889 土壤速效钾和缓效钾含量的测定 NY/T 1121.1 土壤检测 第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存 NY/T 1121.2 土壤检测 第2部分：土壤 pH 的测定 NY/T 1121.6 土壤检测 第6部分：土壤有机质的测定 NY/T 1121.7 土壤检测 第7部分：土壤有效磷的测定 NY/T 1121.24 土壤检测 第24部分：土壤全氮的测定 自动定氮仪法 NY/T 1848 中性、石灰性土壤铵态氮、有效磷、速效钾的测定 联合浸提-比色法 NY/T 1849 酸性土壤铵态氮、有效磷、速效钾的测定联合浸提-比色法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 土壤肥力 soil fertility 土壤为植物正常生长提供并协调营养物质和环境条件的能力，是土壤物理、化学和生物学性质的综 合反映。 3.2 土壤肥力指标 soil fertility index 用于评价土壤肥力水平的土壤物理、化学和微生物学性质的指标。 3.3 化学肥力指标 soil fertility chemical index 土壤 pH、有机质、全氮、全磷、全钾、碱解氮、铵态氮、硝态氮、有效磷、速效钾等土壤肥力指 标。 1 DB22/T 3078—2019 3.4 微生物学肥力指标 soil fertility microbial index 土壤微生物数量、土壤微生物量碳、土壤微生物量氮、土壤酶活性等土壤微生物学指标。 3.5 土壤肥力评价 soil fertility evaluation 根据土壤肥力的物理、化学和生物学各指标、特性的数量和质量，对土壤肥力综合水平的评定。本 标准是基于土壤化学肥力指标的评价。 4 样品采集制备 4.1 采集 7 月中旬至 8 月中旬，采集 0 cm ～ 20 cm 土壤样品。采样应符合 NY/T 1121.1 的规定。 4.2 制备 样品采集后，去除石砾和植物残根等杂物，分装 2 份，1 份置于 4 ℃ 冰箱保存，用于测定土壤 含水量、微生物数量、土壤酶活性和微生物量碳、微生物量氮；另 1 份风干后用于测定土壤化学肥力 指标。 5 土壤肥力评价 5.1 化学肥力指标测定 检测方法按表 1 执行。 表1 不同肥力黑土耕地土壤化学肥力指标选择与检测方法 指标名称 土壤 pH 土壤含水量 / % 检测方法 NY/T 1121.2 NY/T 52 土壤全氮 /（g/kg） NY/T 1121.24 土壤全磷 /（g/kg） NY/T 87 土壤全钾 /（g/kg） NY/T 86 土壤有机质 /（g/kg） NY/T 1121.6 土壤碱解氮 /（mg/kg） LY/T 1228 土壤有效磷 /（mg/kg） NY/T 1121.7 土壤速效钾 /（mg/kg） NY/T 889 土壤铵态氮 /（mg/kg） 土壤硝态氮 /（mg/kg） 5.2 土壤肥力评价 土壤化学肥力参考值见表 2。 2 NY/T 1848 NY/T 1849 GB∕T 32737 DB22/T 3078—2019 表2 有机质 有效磷（P） 速效钾（K） 碱解氮（N） 产量 g/kg mg/kg mg/kg mg/kg kg/hm2 高肥力 ≥ 30 ≥ 35 ≥ 180 ≥ 180 ≥ 12000 中肥力 20 ～ 30 25 ～ 35 110 ～ 180 120 ～ 180 10000 ～ 12000 低肥力 ≤ 20 ≤ 25 ≤ 110 ≤ 120 ≤ 10000 肥力水平 6 土壤化学肥力参考值 土壤微生物学肥力指标 6.1 微生物学肥力指标测定 6.1.1 微生物数量 测定细菌、真菌、放线菌的数量，方法见附录 A。 6.1.2 微生物量碳 测定方法见附录 B。 6.1.3 微生物量氮 测定方法见附录 C。 6.1.4 土壤酶活性 测定脲酶、过氧化氢酶、磷酸酶、蔗糖酶活性，方法见附录 D。 6.2 土壤微生物学肥力评价 6.2.1 微生物数量参考值 微生物数量参考值见表 3。 表3 不同肥力土壤微生物数量参考值 肥力水平 微生物数量 / Log（cfu/g 干土） 低肥力 中肥力 高肥力 细菌 ≤ 8.29 8.29 ～ 8.51 ≥ 8.38 真菌 ≥ 4.03 2.97 ～ 4.10 ≤ 3.4 放线菌 ≤ 5.87 5.80 ～ 6.68 ≥ 6.61 6.2.2 微生物量碳、氮参考值 微生物量碳、氮参考值见表 4。 3 DB22/T 3078—2019 表4 不同肥力土壤微生物量碳、氮参考值 肥力水平 微生物量 低肥力 中肥力 高肥力 微生物量碳 /（mg/kg） ≤ 205.58 204.3 ～ 308.93 ≥ 278.86 微生物量氮 /（mg/kg） ≤ 61.55 56.8 ～ 95.87 ≥ 87.11 6.2.3 土壤酶活性参考值 土壤酶活性参考值见表 5。 表5 酶活性 不同肥力土壤酶活性参考值 肥力水平 低肥力 中肥力 高肥力 脲酶 /（NH3 -N mg/g/24h） ≤ 12.10 11.45 ～ 27.11 ≥ 22.74 过氧化氢酶 /（mL KMnO4/g 干土） ≤ 1.83 1.48 ～ 2.40 ≥ 2.07 磷酸酶 /[mg 酚/(g 干土·24h)] ≤ 1.30 1.30 ～ 1.74 ≥ 1.60 蔗糖酶 /（mL Na2S2O3/g 干土） ≤ 6.86 6.70 ～ 9.00 ≥ 8.53 4 DB22/T 3078—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 土壤微生物数量的测定 A.1 原理 稀释平板法是测定土壤微生物数量最常用的一种方法。土壤微生物在高度稀释条件下可以在固体平 板上生长形成分散的菌落，即一个菌落代表一个单细胞。根据平板上的菌落数换算得到单位重量的土壤 微生物数量。 A.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： A.2.1 天平：感量为 0.01 g。 A.2.2 恒温培养箱：30 ℃ ± 1 ℃。 A.2.3 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度） ；也可是微量移液器及吸头。 A.2.4 无菌锥形瓶：容量 500 mL。 A.2.5 无菌培养皿：直径 90 mm。 A.3 试剂 A.3.1 A.3.1.1 LB 培养基（测量细菌数量） 成分 A.3.1.1.1 A.3.1.1.2 A.3.1.1.3 A.3.1.1.4 A.3.1.1.5 A.3.1.2 胰蛋白胨 10.0 g 酵母浸粉 5.0 g 氯化钠 10.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水 1000 mL 制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH 至 7.0 ± 0.1，分装，121 ℃ 高压灭菌 15 min。 A.3.2 A.3.2.1 PDA 培养基（测量真菌数量） 成分 A.3.2.1.1 A.3.2.1.2 A.3.2.1.3 A.3.2.1.4 A.3.2.2 马铃薯浸粉 6.0 g 葡萄糖 20.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水 1000 mL 制法 5 DB22/T 3078—2019 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH 至 5.6 ± 0.2，分装，121 ℃ 高压灭菌 15 min。 A.3.3 高氏一号培养基（测量放线菌数量） A.3.3.1 成分 A.3.3.1.1 A.3.3.1.2 A.3.3.1.3 A.3.3.1.4 A.3.3.1.5 A.3.3.1.6 A.3.3.1.7 A.3.3.1.8 A.3.3.2 可溶性淀粉 20 g 硝酸钾 1 g 磷酸氢二钾 0.5 g 硫酸镁 0.5 g 氯化钠 0.5 g 硫酸亚铁 0.01 g 琼脂 20 g 蒸馏水 1000 mL 制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH 至 7.3 ± 0.1，分装，121 ℃ 高压灭菌 15 min。 A.4 操作步骤 A.4.1 用天平称取 10.00 g 土样加入盛有 100 mL 无菌水的 500 mL 三角瓶中，在振荡机上振荡 10 min，形成土壤悬液。 -1 A.4.2 吸取 1 mL 土壤悬液到 9 mL 灭菌水中，并在灭菌水中反复吸入吹出 3 次～ 5 次，记为 10 ， -6 按 10 倍法稀释，通常稀释到 10 。 -3 A.4.3 根据各类微生物在土壤中数量的多少选择适当稀释的土壤悬液接种。稀释度真菌一般为 10 ～ -1 -5 -3 -6 -4 10 ，放线菌为 10 ～ 10 ，细菌为 10 ～ 10 ，每一稀释度重复 3 次～ 5 次。 A.4.4 先于直径为 9 cm 的灭菌培养皿中倾注 18 mL 左右的培养基，凝固后，吸取 0.1 mL 某一稀释 度土壤悬液于固体平板中，然后立即用涂布棒将悬液均匀涂抹于固体平板表面。 A.4.5 将培养皿倒置于恒温培养箱中 28 ℃ ～ 30 ℃ 培养，培养一定时