ICS 65.020.20 B 38 山 DB14 西 省 地 方 标 准 DB14/T 2016—2020 党参组培苗生产技术规程 2020 - 03 - 31 发布 山西省市场监督管理局 2020- 06 - 01 实施 发 布 DB14/T 2016—2020 目  次 前言...................................................................................................................................................................... II 1 范围................................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件.............................................................................................................................................1 3 术语和定义..................................................................................................................................................... 1 4 设施设备......................................................................................................................................................... 1 5 生产流程......................................................................................................................................................... 1 6 环境消毒......................................................................................................................................................... 1 7 组培苗生产..................................................................................................................................................... 2 8 炼苗及移栽..................................................................................................................................................... 3 9 生产档案......................................................................................................................................................... 4 附录 A（资料性附录） 培养基配制...............................................................................................................5 附录 B（资料性附录） MS 培养基配方........................................................................................................ 6 I DB14/T 2016—2020 前  言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由山西省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山西省农业标准化委员会归口。 本标准起草单位：山西省医药与生命科学研究院、平顺县水果蚕桑开发服务中心。 本标准主要起草人：李香串、吕鼎豪、王金金、张豆豆、康敏、李晓敏、曲继旭、张文静、董晓丽、 刘辉见、陈素萍、秦金山、王金娥。 II DB14/T 2016—2020 党参组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了党参组培苗生产的术语和定义、设施设备、生产流程、环境消毒、组培苗生产、炼苗 及移栽、生产档案。 本标准适用于党参组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 29375 马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程 GB 50073 洁净厂房设计规范 3 术语和定义 下列术语和定义适合于本文件。 3.1 党参组培苗 以桔梗科党参属植物党参[Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. ]的上胚轴为外植体，通过植物组织培养 技术获得的种苗。 4 设施设备 4.1 生产环境设施和卫生应符合 GB/T 29375、GB 50073 的规定。 4.2 应有完善的组培、炼苗设施设备。 5 生产流程 选种→消毒→育苗→愈伤组织培养→继代培养→分化培养→生根培养→炼苗→移栽 6 环境消毒 6.1 接种室、培养室应保持卫生，定期消毒，每周至少消毒 1 次。按照 40 % 甲醛和高锰酸钾 2:1 的 比例，将 10 ml 40 % 的甲醛溶液倒入高锰酸钾含量为 5 g 的容器内，进行密闭熏蒸，1 d 后通风。 1 DB14/T 2016—2020 6.2 每次使用超净工作台前，应提前 20 min 打开紫外灯。接种时关闭紫外灯打开风机，超净工作台 面及内壁用 75 % 乙醇擦拭消毒。 6.3 操作使用的所有工具，应提前灭菌。镊子、剪刀、解剖刀等工具，每次使用前接触植物材料的部 分应灼烧消毒或插入紫外消毒器，避免交叉污染。 6.4 7 发现污染及时清除。 组培苗生产 7.1 选种 选择粒大饱满成熟的党参种子。 7.2 消毒 用自来水流动冲洗种子表面尘埃，再用饱和漂白粉水溶液漂洗 15 min。在超净工作台中，将漂洗 后的种子放入 10 % 次氯酸钠溶液中浸泡消毒 15 min ~ 20 min，无菌水冲洗 3 次，再用无菌滤纸吸干 种子表面水分。 7.3 育苗 7.3.1 接种 在无菌条件下将消毒后的种子接种于MS+水解乳蛋白 500 g/L 培养基上，培养基配制见附录A。 7.3.2 培养 在 25 ℃ ~ 30 ℃，光照强度 2 000 lx，光照时间 8 h/d ~10 h/d 的无菌条件下培养 10 d 获得幼苗。 7.4 愈伤组织培养 7.4.1 接种 在无菌条件下将种子出芽后的上胚轴切成 0.1 cm ~ 0.3 cm 的小段，接种于 MS+2,4-D 1.5 mg/L+玉米 素 1.0 mg/L 培养基上，培养基配制见附录 A。 7.4.2 培养 在 25 ℃ ~ 30 ℃的无菌条件下暗培养 10 d ~15 d，可诱导出愈伤组织。 7.5 继代培养 7.5.1 接种 在无菌条件下将分取后的愈伤组织接种于 MS+2,4-D 1.5 mg/L+玉米素 1.0 mg/L 培养基上，培养基 配制见附录 A。 7.5.2 培养 在 25 ℃ ~ 30 ℃的无菌条件下暗培养。继代周期为 30 d~35 d，连续继代繁殖应控制在 10 代以内。 7.6 2 分化培养 DB14/T 2016—2020 7.6.1 接种 在无菌条件下选择生长健康的愈伤组织，接种于 MS+KT 0.5 mg/L+玉米素 0.5 mg/L + NAA 0.1 mg/L+ IAA 0.1 mg/L 培养基上，培养基配制见附录 A。 7.6.2 培养 在 25 ℃ ~ 30 ℃ ，光照强度 2 000 lx ，光照时间 8 h/d ~ 10 h/d 的无菌条件下培养 15 d ~ 20 d 后获 得不定芽。 7.7 生根培养 7.7.1 接种 在无菌条件下，挑选生长健壮的单芽接种于 1/2 MS+IBA 0.1 mg/L 培养基上，培养基配制见附录A。 7.7.2 培养 在 25 ℃ ~ 30 ℃ ，光照强度 2 000 lx，光照时间 8 h/d~10 h/d 的无菌条件下培养 15 d，获得具根、 茎、叶的组培苗。 8 炼苗及移栽 8.1 炼苗 8.1.1 封口炼苗 每年 4月~5月期间，当组培苗根系长度 ≥ 3.0 cm 时，将瓶苗移至炼苗棚，封口炼苗 5 d ~10 d。 8.1.2 开口炼苗 拧开培养瓶瓶盖炼苗 1 d ~2 d，期间应注意防雨水。 8.2 基质 选择微生物少、透气性好、保水能力较强的育苗土为基质，移栽前用多菌灵消毒，按照农药标签使 用。 8.3 移栽 取出组培苗，在清水中洗净根部培养基，晾干后移栽至浇透水的育苗基质中。 8.4 管理 组培苗移栽后 5 d ~10 d ，按照农药标签配制甲基托布津溶液，喷雾 2 次~3 次。移栽 15 d 后， 根据小苗长势，降低棚内温度，减少喷水次数，使小苗适应外部环境。定期检查，及时剔除死苗、病株。 8.5 出圃 根长 ≥15 cm，根直径 ≥3 mm，生长健壮，外观形态正常，未发生检疫病虫害的种苗可以出圃。 9 生产档案 3 DB14/T 2016—2020 组培苗生产过程要进行详细的记录，