ICS 65.020.01 B 04 唐 山 市 地 DB1302 方 标 准 DB1302/T 509—2020 青贮玉米中 8 种氨基甲酸酯农药残留 量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 2020-08-20 发布 唐山市市场监督管理局 2020-09-20 实施 发布 DB1302/T 509—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由唐山市市场监督管理局提出并归口。 本标准起草单位：唐山市食品药品综合检验检测中心。 本标准主要起草人：赵海涛、王帅、闫艳华、张贺凤、杜雪娜、王磊、王雅静、汤思凝、张亮、周 彦成、刘会会、张谊、薄会娜、湛毅强、薛凤珍、李丽媛。 I DB1302/T 509—2020 青贮玉米中 8 种氨基甲酸酯农药残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了采用液相色谱-质谱/质谱法测定青贮玉米中8种氨基甲酸酯农药残留量的方法。 本标准适用于青贮玉米中8种氨基甲酸酯农药残留量的测定，其他同类型农药残留量的测定可参照 执行。 本标准定量测定的8种农药测定下限为0.04 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法 3 原理 试样经乙腈匀浆提取，氯化钠盐析，氨基固相萃取柱净化，用二氯甲烷+甲醇（95+5）洗脱农药， 液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为 GB/T 6682 规定的一级水。 乙腈，色谱纯。 甲醇，色谱纯。 二氯甲烷，色谱纯。 氯化钠，140 ℃ 烘烤 4 h。 氨基固相萃取柱：1000 mg，6 mL。 滤膜，0.22 μm 有机系滤膜。 淋洗液：二氯甲烷+甲醇（95+5，体积比）。 8 种氨基甲酸酯农药标准品见表 1。 表1 8种氨基甲酸酯农药标准品 序号 中文名 浓度/（mg/kg） 纯度/（％） 溶剂 1 涕灭威亚砜 1000 ≥96 甲醇 2 涕灭威砜 1000 ≥96 甲醇 3 灭多威 1000 ≥96 甲醇 4 3-羟基克百威 1000 ≥96 甲醇 1 DB1302/T 506—2020 表1 8种氨基甲酸酯农药标准品（续） 序号 中文名 浓度/（mg/kg） 纯度/（％） 溶剂 5 涕灭威 1000 ≥96 甲醇 6 甲萘威 1000 ≥96 甲醇 7 异丙威 1000 ≥96 甲醇 8 克百威 1000 ≥96 甲醇 4.9 4.9.1 标准溶液配制 混合标准溶液 分别取各农药标准储备液 50 μL 于 5 mL 容量瓶中用丙酮分别稀释定容到 5 mL，配成浓度为 10 μg/mL 的使用液，密封储存于 4 ℃冰箱，备用。 4.9.2 基质混合标准工作溶液 取样品空白溶液分别配制 0.02 μg/mL、0.04 μg/mL、0.06 μg/mL、0.08 μg/mL、0.12 μg/mL、0.16 μg/mL、0.32 μg/mL 的基质混合标准工作液，现用现配。 5 仪器设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 6 液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）。 破壁料理机。 氮吹仪。 涡旋混合器。 分析天平：感量0.01 g。 均质器。 容量瓶：5 mL。 移液器：2 mL。 样品瓶：2 mL，带聚四氟乙烯旋盖。 测定步骤 6.1 试样制备 取不少于 1000 g 样品，去除其中杂物，将样品四分缩分至 250 g，粉碎后密封，制成试样备用，剩 余试样于-18 ℃保存。 6.2 提取 称取25 g（精确至0.01 g）样品于200 mL烧杯中，加入50 mL乙腈，用均质器匀浆提取2 min后用滤 纸过滤，滤液收集到装有6 g氯化钠的100 mL具塞量筒中(氯化钠量以足量饱和即可)，剧烈震荡30 s，在 室温下静置30 min，使乙腈和水相分层。 6.3 2 净化 DB1302/T 509—2020 从具塞量筒中的乙腈层中吸取10.00 mL上清液于15 mL试管中，在80 ℃的氮吹仪上缓慢吹至近干， 加入2.0 mL二氯甲烷+甲醇（95+5），在涡旋混合器上涡旋30 s，待净化。将氨基固相萃取柱用3.0 mL 二氯甲烷+甲醇（95+5）预淋洗，条件化，当溶液液面达到柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液， 用15 mL刻度离心管接收洗脱液，用4 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）冲洗试管后淋洗氨基固相萃取柱，并 重复三次，收集洗液，在50 ℃的氮吹仪上缓慢吹至近干，加入2.0 mL甲醇混匀，经0.22 μm的有机系 滤膜过滤后移入2 mL自动进样器样品瓶中，待测。 6.4 测定条件 6.4.1 液相色谱条件 6.4.1.1 6.4.1.2 6.4.1.3 6.4.1.4 6.4.1.5 色谱柱：H18，（50 mm×3.00 mm，2.60 μm）。 柱温：40 ℃。 进样量：2 μL。 流速：0.40 mL/min。 流动相：A：甲醇；B：5 mmol 甲酸铵+0.05%甲酸水溶液，梯度洗脱条件见表 2。 表2 6.4.2 梯度洗脱条件 时间/min A（甲醇）/％ B（5mmol甲酸铵+0.05%甲酸水溶液）/％ 0.00 100 0 0.50 90 10 5.00 5 95 8.00 5 95 8.01 90 10 10.00 100 0 质谱参考条件 6.4.2.1 6.4.2.2 6.4.2.3 6.4.2.4 6.4.2.5 6.4.2.6 6.4.2.7 6.4.2.8 离子源：电喷雾离子源（ESI）。 扫描方式：正离子扫描。 监测方式：多反应监测（MRM）。 雾化气流量：3.0 L/min。 干燥气流量：15.0 L/min。 加热块温度：400 ℃。 DL管温度：400 ℃。 8 种氨基甲酸酯农药质谱参数见表 3。 表3 化合物名称 保留时间 （min） 8种氨基甲酸酯农药质谱参数 定量离子 定性离子 碰撞电压 (V) 涕灭威亚砜 3.008 207.10/89.00 207.10/132.00；207.10/89.00 14；8 涕灭威砜 3.236 240.10/86.00 240.10/86.00；240.10/223.00 21；8 灭多威 3.908 163.05/88.00 163.05/88.00；163.05/106.05 8；10 3-羟基克百威 4.601 238.10/163.10 238.10/163.10；238.10/181.20 14；10 涕灭威 5.330 208.10/116.00 208.10/116.00；208.10/89.10 15；20 3 DB1302/T 506—2020 表3 化合物名称 6.5 保留时间 （min） 8 种氨基甲酸酯农药质谱参数(续) 定量离子 定性离子 碰撞电压 (V) 甲萘威 6.202 202.05/145.05 202.05/145.05；202.05/127.05 9；27 异丙威 6.208 194.10/95.00 194.10/95.00；194.10/137.10 20；15 克百威 6.157 222.30/165.10 222.30/165.10；222.30/123.10 17；20 液相色谱-质谱/质谱测定 6.5.1 定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除 背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准品的离子丰度比相一致 （相对丰度>50％，允许±20％偏差；相对丰度>20％～50％，允许±25％偏差；相对丰度>10%～20％， 允许±30％偏差；相对丰度≤10％，允许±50％偏差），则可判断样品中存在这种农药。 6.5.2 定量测定 本标准中液相色谱-质谱/质谱采用外标-校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量 用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药的响应值均在仪器的 线性范围内。8种氨基甲酸酯农药的多反应监测（MRM）色谱图见附录A。 6.6 平行试验 按上述步骤对同一试样进行平行试验。 6.7 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 6.8 结果计算和描述 按式（1）计算试样中 8 种氨基甲酸酯农药的含量，计算结果需将空白值扣除。 X  c V 1000  ……………………………………………（1） m 1000 式中： X一试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）; V一样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m一样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。 计算结果应扣除空白值。 7 测定下限、精密度 7.1 测定下限 本方法8种氨基甲酸酯农药测定下限为0.04 mg/kg。 4 DB1302/T 509—2020 7.2 精密度 在重复性条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限（r）。精密度数据表见表4。 在再现性条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过再现性限（R）。精密度数据表见表4。 表4 精密度数据表 含量 重复性限 再现性限 含量 重复性限 再现性限 含量 重复性限 再现性限 （mg/kg） （r） （R） （mg/kg） （r） （R） （mg/kg） （r） （R） 涕灭威亚砜 0.04 0.0027 0.0064 0.08 0.0036 0.0076 0.2 0.0129 0.0075 涕灭威砜 0.04 0.0032 0.0075 0.08 0.0059 0.0105 0.2 0.0243 0.0597 灭多威 0.04 0.0029 0.0056 0.08 0.0046 0.0095 0.2 0.0126 0.0394 3-羟基克百威 0.04 0.0067 0